DNA Minipreparation

소개

실험 레포트입니다.

목차

Purpose
Introduction
Method
Result and discussion

본문내용

Purpose

(1) transformation 된 박테리아에서 plasmid DNA를 뽑아낼 수 있다.
(2) gel electrophoresis를 통해 DNA를 분리하는 방법을 배운다.
(3) DNA추출과 전기영동에 이용된 시약의 특성을 이해한다.
(4) 클로닝에 이용되는 plasmid의 특성 및 제한효소의 기능을 이해한다.

Introduction

(1) DNA minipreparation

주로 miniprep이라고 부르는 이 방법은 plasmid DNA를 소량 분리하는 방법입니다. 여러가지 방법이 있지만, 여기서는 가장 보편적으로 사용되는 방법인 Alkali lysis method을 소개합니다.
기본적인 원리는 그림에서 보듯이 세균의 cell wall과 cell membrane을 부수고 DNA 만을 분리하는 것입니다.
이 때 중요한 것은 세균이 원래 가지고 있는 chromosomal DNA와 plasmid DNA를 구분하여 분리하는 것입니다. 이 둘은 모두 DNA이므로 성질이 비슷하기 때문에 구분하여 분리하기가 쉽지 않습니다. 다행히 chromosomal DNA는 분리 과정에서 linear 형태가 되고 크기가 상당히 크기 때문에 이런 성질의 차이를 이용하면 분리할 수 있습니다.

(2) Alkali lysis method 의 원리

1. 세포벽을 깹니다. 이 때 세포막은 유지되도록 합니다. 세포벽을 군데군데 무너뜨리는 물 질은 EDTA이며, 이때 sucrose나 glucose가 첨가되어 세포의 형태를 유지하도록 합니 다. 때로는 lysozyme을 쓰기도 합니다.
2. 세포막을 조심스럽게 깨서 크기가 큰 chromosomal DNA가 너무 잘게 조각나는 것을 방 지하면서 용액에 DNA 를 노출시킵니다. SDS라는 detergent가 세포막을 녹여버리면서 안에 있던 세포 내용물이 용액으로 흘러나오게 됩니다. 이때 바로 alkali 용액에 노출된 DNA는 모두 denature 됩니다.

참고자료

· ∘Life The Science of Biology, 7판, Purves외 3명, Sinauer Associates, ine, W. H. freeman and Company, 2004, p319-320
· ∘The Cell a molecular approach, 3판, Geoffrey외 1명, SINAUER, p112-113
· ∘Molecular Cloning, 3판, Joseph Sambrook, David W.Russell, cold spring harbor laboratory press, p5.9, pA9.29-9.3, pA9.4
· ∘Essential cell biology, 2판, 박상대, Garland Science, p165
· ∘GENETICS, Pierce. Freeman. 2nd edition