plasmid분리(결과

소개

plasmid분리(결과 보고서입니다.

목차

◆ Abstract
◆ Introduction
◆ Material
◆ Result
◆ Discussion
◆ Reference

본문내용

◆ Abstract
지난 시간, transformation 과정까지 완료하고 colony를 배양해 낸 것을 하나씩 따내어
LBA(liquid) tube에서 37℃로 12hr동안 배양한 것을 이번 실험에 이용.

→ Plasmid DNA 분리
․ 원심분리 하여 cell만 모았다.
․ solution 1, 2, 3 을 차례로 넣어주었다.
․ 원심분리 하고 membrane column에 걸러주었다.
․ 원심분리 하고 에탄올이 들어있는 buffer로 washing해 주었다.
․ 원심분리 하고 UPW를 넣었다.
․ 최종으로 원심분리 하였다.
․ 분리된 DNA, buffers, enzymes, UPW를 적당 비율 혼합하여 37℃에서 1hr 배양하였다.

우리가 분리해내려 했던 plasmid DNA는 750bp 였다.

◆ Introduction
transformation 시킨 e.coli를 배양 하였는데, 여기서 몇 가지 단계를 거쳐 plasmid DNA를
다시 분리해 낼 수 있다.
bacteria cell을 깨어 RNase A 용액 존재하에 NaOH와 SDS에 의해 용해시키고 lysate를 고염도와 acidic한 환경으로 노출시킨다. 침전된 불순물은 원심분리를 하여 제거 한 후 순수한 plasmid DNA만을 취해 washing, elution을 시켜주면 plasmid DNA의 분리 단계가 끝나는 것이고 enzyme 처리 후 이를 배양시켜 전기영동 하면 원하는 DNA가 분리되었는지 눈으로 확인할 수 있다.
위 실험을 통하여 유전공학에서 가장 많이 사용되는 미생물인 대장균 배양, plasmid DNA를 분리에 대한 지식과 기술을 습득할 수 있다.

참고자료

· - 생명공학실험1, 아주대학교, pp.27-30.
· - 유전자 클로닝 입문, 강종백 외 4, 월드 사이언스 , 2004, pp.92-95.
· - E. coli Plasmid Vectors : Method and Application, Humana Press, 2003.
· - Bacillus subtilis로부터 ampicillin 저항성을 지니는 plasmid의 분리 및 특성 분석
· ( Isolation and Characterization of Ampicillin - Resistant Plasmid in Bacillus Subtilis),
· 이희명 이형범, 한국유전학회, 1986.
· - Bio Medical Research, 유욱준, 신기획, 1998, pp.26-36.
· - 식물 발생공학의 미래, 빈철구, 서원, 1993, pp.47-58.