생물학 실험 A+) 대장균 배양과 형질전환과 plasmid DNA 추출 및 전기 영동 실험 보고서

최초 등록일
2020.08.12
최종 저작일
2020.05
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"생물학 실험 A+) 대장균 배양과 형질전환과 plasmid DNA 추출 및 전기 영동 실험 보고서"에 대한 내용입니다.

목차

I. 서론
II. 재료 및 방법
III. 실험 결과
IV. 논의

본문내용

생명공학의 연구 대상은 고등 생물부터 원핵 생물인 미생물까지일 정도로 폭 넓은 실험군이 존재한다. 가장 널리 또 유용성 있게 사용되는 생물은 원핵생물이자 미생물의 일종인 대장균(Escherichia coli, E. coli)이다. 대장균은 그람음성의 타원형 모양의 균이다. 타원형 모양으로 간균으로 분류되며 세균역 장내세균과 대장균속에 속하는 생물이다. O157:H7 항원형과 같은 특수한 경우가 아니라면 인체에 해를 끼치는 않는다. 또한 Vit K2 등을 생산하는 역할을 담당하기도 한다. 좋은 환경에서는 20분마다 분열이 가능하기 때문에 번식이 쉽고 유전적으로도 단순한 편에 속하여 원핵생물의 표준 연구생물이다. 환경이 좋다면 지속적으로 계속 번식하는 것으로 착각할 수 있지만 처음 3일 정도만 기하급수적으로 증가하며 이후에는 천천히 감소하게 된다(Russell,Jarvis, 2001).
대장균을 실험실의 환경에서 성장시키기 위해서는 알맞은 환경을 조성하여 주어야한다. 배지가 그 역할을 수행한다. 배지는 상태에 따라 고체 배지와 액체 배지로 나눈다. 고체 배지와 액체 배지의 제조법은 동일하지만 Agar의 유무에 따라 고체와 액체가 갈리게 되는 것이다. 액체 배지의 경우 대량으로 키울 때 유리하며 고체 배지의 경우 단일 콜로니를 분리하는 것에 강점이 있다. 주로 미생물을 키울 때 사용되지만 동물세포나 식물세포를 키울 때도 사용되며 그에 따른 배지가 따로 존재한다. 동물세포를 키우는 배지의 경우 액체배지만 존재한다. 배지에 들어가는 물질은 Glucose와 같은 탄소원, 물, 무기염류, 아미노산과 질소원이다. 이번 실험에서 제작하는 배지는 LB 배지로 질소원과 아미노산 제공의 역할을 Yeast Extract가 수행한다. 가장 널리 사용되는 배지는 LB(Lysogeny broth) 배지이다. 1950년대부터 사용된 배지이며 크게 LB-Miller, LB-Lennox, LB-Luria 등이 있다(Miller, 1972).

참고 자료

Campbell. 2013. Campbell Biology. pp.413-414
Chao Ji, Lingyun Zhang, and Pengye Wang. 2015. Configuration Transitions of Free Circular DNA System Induced by Nicks, Journal of Nanomaterials, Article ID 546851.
Flowers, G. P., & Crews, C. M. 2015. Generating and identifying axolotls with targeted mutations using Cas9 RNA-guided nuclease. In Salamanders in Regeneration Research Humana Press, New York, NY. pp.279-295.
Lennox, E. S. 1955. Transduction of linked genetic characters of the host by bacteriophage P1. Virology. 1 (2) pp.190–206.
Luria, S. E.; Adams, J. N.; Ting, R. C. 1960. Transduction of lactose-utilizing ability among strain of E. coli and S. dysenteriae and the properties of the transducing phage particles. Virology. 12 (3) pp.348–390
Miller, J. H. 1972. Experiments in molecular genetics. Cold Spring Harbor Laboratory, Cold Spring Harbor, New York.
Smillie C, Garcillán-Barcia MP, Francia MV, Rocha EP, de la Cruz F. 2010. Mobility of plasmids. Microbiology and Molecular Biology Reviews. 74 (3) pp.434–452.
https://www.neb-online.de/en/competent-cells/chemical-transformation-tips/ Accessed 2020.05.08.
https://www.snapgene.com/resources/plasmid-files/?set=crispr_plasmids&plasmid= pDR274 Accessed 2020.05.05.

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