[생물공정실험] 2주차 RNA extraction and quantification 결과보고서

목차

1. 실험방법
2. 실험결과 및 해석
3. 고찰
4. 참고문헌

본문내용

이번 실험을 통해 EGFP가 있는 세포와 EGFP가 없는 세포에 Trizol을 처리한 후 RNA를 정 제하여 nano drop을 이용해 농도와 순도를 알아보았다. 먼저 Trizol, phenol, GITC를 사용 해 homogenization을 진행해야하는데 사전에 준비되어 있었다. Trizol은 phenol+guanidine isothiocyanate로 구성되어 산성 phenol(pH4)으로 단백질과 지질을 분해하여 세포막과 세포 내 미세기관들을 파괴하고 RNA만 선택적으로 분리할 수 있게 한다. 동시에 GITC(guanidine isothiocyanate)로 Rnase를 억제하기 위해 쓰였다. 이때 phenol은 강한 산성으로 DNA를 파 괴(depurination)하지만 RNA는 안정(depurination)하다. DNA는 변성되면 chloroform층으 로 녹아들어간다. 완충액과 함께 조직이나 세포를 균질화하고 균질화된 용액을 원심분리하면 밀도가 낮은 지방, 단백질 등은 상층부에 뜨며 DNA는 중간 부위에 그리고 가장 밀도가 높은 RNA가 바닥에 침전되도록 하여 순수 RNA를 정제한다.

참고자료

· Measuring RNA with NanoDrop – Protocol Place
· RNA를 이용한 분자생물학적 연구, 충남대학교 의과대학 내과학교실, 이강욱