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GFP: 형광 단백질의 원리와 연구 응용2025.12.181. GFP(녹색 형광 단백질)의 발견과 원리 GFP는 일본 과학자 시모무라 오사무가 형광 해파리(Aequorea Victoria)에서 발견한 최초의 형광 단백질입니다. 형광은 전자가 빛에 의해 여기되어 기저 상태로 돌아올 때 가시광선을 방출하는 현상입니다. GFP의 발광 원리는 Ser-Tyr-Gly로 구성된 발색단에 기반하며, 파이 시스템의 전자가 청색광을 흡수하여 높은 에너지 상태로 여기되고 녹색광을 방출합니다. 이 발색단 아미노산은 6개의 베타 시트로 둘러싸여 보호됩니다. 2. GFP의 연구 응용 및 특성 GFP는 형광을 방출...2025.12.18
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재조합 DNA 구성 및 대장균에서의 GFP 발현2025.11.121. 재조합 DNA 구성 재조합 DNA는 서로 다른 출처의 DNA 단편을 결합하여 새로운 DNA 분자를 만드는 기술입니다. 제한효소를 이용하여 DNA를 절단하고 DNA 리가제로 연결하는 과정을 통해 목적하는 유전자를 벡터에 삽입합니다. 이 기술은 유전공학의 기초가 되며 단백질 생산, 유전자 치료 등 다양한 분야에 응용됩니다. 2. GFP 형질전환 GFP(Green Fluorescent Protein)는 녹색 형광 단백질로, 자외선 또는 청색광에 노출되면 녹색 형광을 발합니다. GFP 유전자를 대장균에 형질전환하면 형광 단백질을 생산...2025.11.12
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GFP 단백질 정량 실험: Lowry assay와 Extinction coefficient assay 비교2025.12.191. Lowry Assay Lowry assay는 Biuret reaction과 Folin reaction을 결합한 단백질 정량법으로, 높은 검출 감도(1 μg)를 가진다. 알칼리성 환경에서 펩타이드 결합과 Cu2+가 복합체를 형성하고, Folin reagent를 환원시켜 750 nm에서 파란색을 띤다. 본 실험에서 BSA를 표준 단백질로 사용하여 표준곡선을 작성했으며, EGFP의 질량농도는 0.45 mg/ml로 측정되었다. 그러나 Tyr, Trp, Cys 잔기 수에 따라 흡광도가 달라지고, 시약 분주 시간 차이, 빛 노출, pip...2025.12.19
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Site-directed Mutagenesis를 이용한 GFP 돌연변이 도입 및 DNA 염기서열 분석2025.12.171. Site-directed Mutagenesis Site-directed mutagenesis는 DNA 서열의 특정 부분에 point mutation, deletion, insertion 등의 돌연변이를 도입하는 방법이다. 이 실험에서는 mutation을 포함하는 DNA primer를 이용하여 pGFPuv에 Y66H와 Y145F mutation을 도입했다. PCR을 통해 open circular DNA를 생성한 후 DpnI 효소로 메틸화된 template DNA를 선택적으로 제거하여 돌연변이를 도입한다. Pfu DNA polym...2025.12.17
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항체 생산 실험: GFP 항원을 이용한 면역반응 유도2025.11.171. 항체 생산 (Antibody Production) 특정 동물에 항원을 주입하여 항체 형성 반응을 유도하는 과정입니다. 본 실험에서는 마우스(Mus musculus)에 GFP 항원을 복강 주사로 3회 투여하여 2차 면역반응을 유발했습니다. 1차 접종에는 Complete Freund's Adjuvant (CFA)를, 2차, 3차 접종에는 Incomplete Freund's Adjuvant (IFA)를 사용했습니다. 최종적으로 심장 채혈을 통해 혈액을 채취하고 원심분리로 혈청을 얻어 항체를 수집했습니다. 2. 면역반응 메커니즘 (I...2025.11.17
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GFP 단백질 정량 실험: Lowry assay와 Extinction coefficient assay 비교2025.12.131. Lowry Assay Lowry assay는 Biuret reaction과 Folin reaction이 합쳐진 단백질 정량 방법이다. Cu2+와 folin reagent의 산화환원반응을 바탕으로 하며, Tyr, Trp, Cys가 산화되면서 750nm 파장에서 파란색을 띠는 heteropolymolybdenum blue가 형성된다. 표준곡선을 이용하여 미지의 단백질 농도를 계산하는 방식으로, 아미노산 조성에 따라 측정값이 영향을 받을 수 있다는 한계가 있다. 2. Extinction Coefficient Assay Extinct...2025.12.13
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Site-directed mutagenesis, DNA sequencing2025.01.221. GFP (green fluorescent protein) GFP는 Aequorea victoria로부터 추출한 형광 단백질로, 빛을 흡수하여 형광을 발광한다. GFP는 11개의 β-sheet가 β-barrel 구조를 이루고 있으며, barrel 내의 chromophore가 빛을 흡수하여 전자를 excitation시키고 바닥 상태로 돌아가면서 형광을 방출한다. GFPuv는 GFP의 variant 중 하나로, UV(ultra violet)을 흡수하여 형광을 방출한다. 2. Site-directed mutagenesis Site-d...2025.01.22
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서강대학교 일반생물학실험1 실험 6. GFP 단백질과 단백질 정량 (Protein Measurements)2025.01.021. 단백질 정량 방법 실험에서는 Lowry assay와 Extinction coefficient assay 두 가지 단백질 정량 방법을 사용하여 EGFP의 질량농도를 측정하였다. Lowry assay는 Biuret reaction과 Folin reaction을 거쳐 750nm에서 흡광도를 측정하고 BSA 표준곡선을 이용하여 EGFP 농도를 계산하였다. Extinction coefficient assay는 EGFP의 몰흡광계수와 Lambert-Beer's Law를 이용하여 488nm에서 EGFP 농도를 직접 계산하였다. 두 방법의 ...2025.01.02
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바이러스학 실험: Transfection과 Subculture2025.12.171. Transfection Transfection은 세포 내부에 외래 유전자를 인위적으로 도입하여 원하는 DNA를 발현시키는 실험 방법입니다. 본 실험에서는 polyethylenimine(PEI)을 transfection reagent로 사용했습니다. PEI는 중성 pH에서 높은 양전하 밀도를 가진 합성 polymer로, 음전하를 띤 DNA를 감싸 세포 내부로 전달하는 역할을 합니다. 293T cell line에 GFP 발현 plasmid DNA를 transfection한 결과, 형광현미경을 통해 녹색 빛을 띠는 세포들이 관찰되어...2025.12.17
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PEI 나노 복합체를 이용한 세포 내 siRNA 전달 및 RNA 간섭 평가2025.01.051. Polyethylenimine (PEI) 나노 복합체 이번 실험에서는 양이온성 branched polyethylenimine (B-PEI)를 이용해 siRNA/PEI 나노입자를 만들고, GFP-silencing siRNA를 암세포 내로 전달하여 RNA interference (RNAi) 간섭 효율을 세포 내 GFP 발현량의 감소로 확인하였다. N/P ratio에 따른 RNA 간섭 효율 변화를 살펴보았는데, N/P ratio가 높아질수록 siRNA가 더욱 응축되어 작은 나노 입자가 형성되고, 나노 입자의 표면 전하가 커져 세포막...2025.01.05
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