DNA gel extraction

소개

유전학실험 레포트

목차

Ⅰ. Abstract
Ⅱ. Introduction
Ⅲ. Materials
Ⅳ. Methods
Ⅴ. Results
Ⅴ. Discussion
Ⅶ. Reference

본문내용

Ⅰ. Abstract

제한효소 처리했던 Insert와 vector만을 추출하고 그것을 정량하는 단계의 실험이다. 제한효소 처리결과 얻고자 하는 것 이외의 불순물이 많이 있으므로 clean up 하는 것이고 우리 실험의 최종 단계인 Ligation을 하기 이전에 이들의 순도를 측정하고 각각을 정량하여 이이 따른 다른 반응액 및 효소의 양을 측정할 수 있다.
insert는 column을 걸어서 제한효소 처리했던 부분을 선택적으로 얻을 수 있고 vector의 경우는 제한효소로 절단한 결과 얻을 수 있는 두 가닥 중 불필요한 부분 역시 크기가 커서 column에 걸리기 때문에 column을 사용할 수 없다. 따라서 vector는 DNA 전기영동을 통해 gel상에 생긴 band를 이용하여 순수 분리 하는 방법을 이용한다.
이렇게 얻은 insert와 vector는 260nm, 280nm의 파장에서 O.D값을 측정하여 순수도를 측정하고, 260nm에서의 OD값으로 concentration을 계산해보고, 앞서 실험한 PCR 결과로도 농도를 계산해본다.
Vector와 Insert 모두 OD값 비율이 1.8 이하로 나와서 단백질과 같은 불순물이 함께 섞여 있는 것으로 보인다. 이러한 결과가 나오면 다시 DNA를 정제해야한다.
OD값을 이용한 농도 정량으로 Vector는 6ng/μl, Insert는 196ng/μl로 측정되었다. 3번째 실험한 HPS17.7 PCR 산물은 5ng/μl, 10ng/μl로 측정되었다.

Ⅱ. Introduction

Exp. 6 DNA gel extraction

In molecular biology, gel extraction or gel isolation is a technique used to isolate a desired fragment of intact DNA from an agarose gel following agarose gel electrophoresis. After extraction,

참고자료

· 없음