ligation

소개

ligation에 관한 리포트입니다.

목차

1. Ligation란
2. ligase란
3. DNA ligase mechanism
4. DNA ligase의 종류 및 이용성
5. Blunt end ligation
6. ligation에 효율에 영향을 주는 factor
7. Ligation 실험 방법
8. Ligation의 효율을 높이는 방법
9. Ligation할 때 ATP가 필요한 이유
10. competent cell

본문내용

1. Ligation란
Ligation은 문자 그대로 DNA나 RNA의 끝을 이어주는 과정을 가리키는 용어이다. 이 반응에 이용되는 효소를 ligase라 하며 DNA를 기질로 사용하는 ligase를 DNA ligase, RNA를 기질로 사용하는 ligase를 RNA ligase라 한다. RNA ligase는 특수한 목적이 아닌 경우 잘 사용하지 않는다. 유전자 재조합 과정에 사용되는 ligase는 주로 DNA ligase이며 이 효소는 원핵세포, 진핵세포, 바이러스 등에서 유래한 것이 있는데, 현재 많이 사용되는 ligase는 T4 DNA ligase와 E. coli DNA ligase이다. T4 DNA ligase는 cofactor로 ATP를 필요로 하고, E. coli ligase는 NAD+를 필요로 한다. 이들 두 ligase는 blunt-ended DNA, cohesive-ended DNA, nicked DNA등에 모두 작용할 수 있으나 E. coli DNA ligase 는 T4 DNA ligase와 비교할 때 blunt-ended DNA에 작용하는 힘이 약하므로 일반적인 유전자 재조합 과정에서는 T4 DNA ligase를 더 많이 사용하는 경향이 있다.
2. ligase란
에너지를 이용하여 두 개의 분자를 결합시키므로 합성효소(合成酵素, synthetase)라고도 한다. 일반적으로는 ATP(아데노신3인산) 또는 이와 유사한 물질에서 인산기(PO₄)를 떼어내고, 이 때 발생하는 에너지를 이용하여 서로 다른 두 분자간의 새로운 화학결합을 형성하는 반응을 촉진하는 효소들을 의미한다. 이 외에도 리가아제는 결합의 역반응인 고에너지인산화합물의 분해에 의한 ATP생산과정에도 참가한다.
DNA ligase는 대장균의 균체 내에도 존재하나 T4 phage가 생산하는 ligase가 강력하여 보통 이것을 사용한다. 이 효소는 DNA의 절단점이 3`-OH말단과 5‘-인산 말단으로 인접되어 있는 경우 이를 연결한다. DNA를 제한효소로 절단하면 5’말단에 인산이 노출되고 3‘말단에는 -OH기가 노출되는데 그러한 단편은 ligase에 의해 결합이 가능하다.

참고자료

· 없음