계대배양과 단백질정량

소개

동물세포를 이용한 실험에 앞서 세포 배양을 위해 계대배양과정을 수행한다.
대부분의 생화학실험의 기본이 되는 과정이라 할 수 있고 생물학 분야의 경우 다른 분야보다 결과를 볼 때까지 뭔가 잘못되었다는 것을 알기 어려워, 준비 단계에서의 단백질 정량이 잘못 이루어지면 헛수고를 하거나 잘못된 결과를 얻을 수 있다. 이러한 이유 때문에, 단백질 정량을 정확하게 하는 것은 매우 중요하고, 이 실험에서는 미지의 단백질을 정량하는 실험을 진행한다.

목차

1. 실험 목적
2. 실험 원리
3. 실험 준비물 및 단계
4. 실험 방법
5. 실험 결과
6. 고찰

본문내용

① Media 제거 (37℃ incubator에 있는 Culture dish)
② HBSS 첨가
- Serum(영양분, cell분리 작용을 저해) 제거 : Trypsin-EDTA가 작용을 잘 하도록 하기 위해서
③ Trypsin-EDTA 첨가 후 37℃ incubator에 2~3분 보관
- cell과 dish 표면 간의 interaction제거 : cell분리
④ DMEM(+) 첨가 후 tube로 옮겨줌.
- DMEM(+)속의 Serum(FBS)이 Trypsin의 활성 억제 및 중단
⑤ , 5분간 원심분리(centrifuge)
- 바닥에 세포가 하얗게 가라앉는다.(매우조금)
⑥ 상층액 제거
- pasteur pippet을 tube안으로 넣지말고 tube를 기울일 것.
⑦ DMEM(+) 첨가 후 pipptting으로 고형물을 풀어줌.
⑧ 0.4% Trypan blue (염색) + cell sol`n 섞어준 후, 세포수 계산(cell counting)
- 혈구계산판(hemacytometer) 사용법 숙지
⑨ Culture dish위에 적당한 양의 새로운 media를 넣어주고 cell name, 날짜, 시험 자 이름, 계대 횟수(passage number)등을 기록
⑩ 2~3일마다 Media를 교체하면서 세포를 배양한다.

▣ 단백질정량

1. 실험 목적
대부분의 생화학실험의 기본이 되는 과정이라 할 수 있고 생물학 분야의 경우 다른 분야보다 결과를 볼 때까지 뭔가 잘못되었다는 것을 알기 어려워, 준비 단계에서의 단백질 정량이 잘못 이루어지면 헛수고를 하거나 잘못된 결과를 얻을 수 있다. 이러한 이유 때문에, 단백질 정량을 정확하게 하는 것은 매우 중요하고, 이 실험에서는 미지의 단백질을 정량하는 실험을 진행한다.

2. 실험 원리
단백질이 당질이나 지질과 다른점은 탄소, 수소, 산소 이외에도 반드시 질소를 함유하고 있는 특질을 가지고 있는 물질 들을 말한다.

참고자료

· 없음