화공기초실험 단백질정량, alp 결과레포트

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목차

1. 실험 목적
2. 이론
3. 기구 및 시약
4. 실험 방법
5. 실험 결과

본문내용

1. 실험 목적
-단백질 정량법: 광도 측정법을 통해 단백질의 농도를 측정하며, 매체에 의한 빛의 흡수가 발생하는 기전에 관하여 알아본다.

-ALP assay: 생물학적 시료나 알칼리성 인산가수분해효소가 활용된  2차 항체를 이용한 ELISA 시, 비색계 포스파타아제 기질인 pNPP를 이용하여 알칼리성 인산가수 분해효소 활성도를 측정한다. 또한, 약물이 세포의 분화에 어떠한 역할을 미치는지 확인한다.

2. 이론
1) 단백질 정량법: 단백질은 우리 신체를 이루고 있는 성분 중 가장 중요한 물질들 중의 하나이다. 단백질을 정량하기에 가장 간편한 방법으로는 자외선 파장에서 단백질 용액의 흡광도를 측정하는 것이다. 순수한 단백질 용액인 경우, 정량적인 농도를 얻을 수 있으며, 여러 단백질들의 혼합물인 시료인 경우, 대략적인 농도를 구할 수 있다.
단백질의 정량은 발색을 통하여 할 수 있다. 발색을 통해 단백질을 정량 하는 방법으로는 Biuret방법, Lowry 방법, Bradford 방법 등 다양한 방법들이 있다.

Biuret방법은 염기성 조건에서 이온과 반응하여 자주색을 띈다. 이러한 성질을 이용하여 Biuret과 비슷한 구조를 가진 단백질을 발색시키는 데에 사용할 수 있다. Biuret방법은 2개 또는 그 이상의 펩타이드 결합을 함유하고 있는 시료가 염기성 조건에서 황산구리에서 생성되는 이온과 펩타이드 질소원자와의 반응에 의해 자주색 화합물을 형성한다. (이 때, 착화합물이 형성되는 양은 단백질의 농도에 비례)
Lowry방법은 가장 민감한 감도를 지닌 방법 중의 하나이기 때문에, 널리 사용되고 있다.
이 방법은 5㎍정도의 소량의 단백질도 측정할 수 있다. 발색의 원리는 Biuret방법과 동일하지만, 발색 강도를 향상시키기 위하여 2차 시약인 Folin-Ciocalteu를 첨가하는 것이 다르다. 이 방법에서 진한 파란색을 발색시키는 두 가지의 반응으로는 1) 염기성 구리와 펩타이드 결합 작용과 2) 단백질 내에 존재하는 tyrosine과 tryptophan에 의한 Folin-Ciocalteu 시약의 환원에 의해서 발생한다.

참고 자료

없음