단백질의 정량분석[예비레포트+실험레포트] 만점자료!

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최초 등록일
2021.02.12
최종 저작일
2021.02
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목차

I. Title. 단백질의 정량분석
1. Purpose
2. Principle & Theory
3. Apparatus & Reagent
4. Procedure
5. Reference

II. 결과레포트
1. 결과분석
2. 나의 역할
3. Reference

본문내용

Purpose
Lowry method와 Bradford method를 사용하여 단백질(protein)의 농도를 측정한다.
Principle & Theory
▶ 단백질
20종류 아미노산들의 한쪽 아미노기와 다른 쪽 카르복실기가 탈수 축합을 통해 화학결합을 형성한 것을 펩티드라 부르며, 단백질은 일반적으로 100개 이상의 많은 아미노산이 펩티드결합으로 결합되어 펩티드 사슬(Polypeptide chain)을 이룬다.
▶ 단백질의 정량
시료 내에 포함된 단백질의 양, 또는 농도를 구하는 과정으로 280 ㎚에서 흡광도를 측정하는 방법과 단백질의 농도에 따른 색의 변화를 이용하여 분석하는 방법이 있다. 색의 변화를 이용하는 비색정량분석 (colormetric analysis)에는 Bradford법, Biuret법, Lowry법, Bicinchoninic acid법 등이 있다.

<중 략>

결과분석
단백질 정량이란 시료 속의 단백질의 양을 정확하게 구하는 방법이다.
Folin-Lowry Method으로 실험을 진행하였는데, 단백질의 아마이드결합에 의한 구리이온의 환원 (Cu2+ → Cu+)을 토대로 측정하는 방식이다. 7개의 시험관에는 각각 넣어야 하는 단백질 표준용액과 증류수를 넣고 나머지 시험관 하나에는 단백질 표준용액 대신 미지시료와 증류수를 첨가하였다. 그리고 나중에 시약 A, B, C를 섞어주는데 그 결과 시험관 시약 색이 노란색과 연두색, 청록색이 띠는 것을 볼 수 있었다. 이는 뷰렛 반응으로 알칼리용액에서 Cu2+가 단백질의 펩티드결합 간의 착화물을 형성해 Cu2+가 Cu1+로 환원된 것이다. 실온에 30분 방치한 뒤에는 청록색에 가까운 파란색계열 색을 볼 수가 있었다. 이는 폴린-시오칼토 반응으로 Cu1+와 펩티드결합의 radical group이 폴린-시오칼토 반응을 환원시켜 진한 청색으로 변한 것이다.

참고 자료

https://m.blog.naver.com/summerh_/221122051482
식품의약품안전처 단백질정량(로리)법 매뉴얼
https://blog.naver.com/sincoccr/220805879481
https://blog.naver.com/8dskhe/221669983097
생화학 분자생물학 실험서/ 범문에듀케이션/ 김 준/ 2011.01.03/p 16~25
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