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식물분자생물학 정리노트 CH12. analysis of transgenic plants

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최초등록일 2025.06.27 최종저작일 2024.11
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식물분자생물학 정리노트 CH12. analysis of transgenic plants
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    • 🔬 PCR, RT-PCR, qPCR 등 실험 기법 체계적 정리
    • 🧪 유전자 발현 및 전이 분석 프로토콜 제공

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    목차

    없음

    본문내용

    12.1 Essential elements of transgenic plant analysis
    형질전환 식물 확인 방법
    Antibiotic selection
    Visual selection or expression of another reporter gene(s) ~ GFP등 활용
    GOI analysis: insertion, copy number, expression, Mendelian segregation

    12.2. Assays for transgenicity, insert copy number, and segregation
    Polymerase chain reaction: to check transgenic gene or expression of the transgenic gene
    식물에 존재하지 않는 primer vector를 활용함
    Forward, reverse primers
    Denaturation (95℃) -> annealing of primers (55℃) -> extension (72℃)

    Primer Design
    DNA는 5’→3’ 방향으로 합성된다는 것을 고려
    DNA 이중가닥은 상보적 염기쌍으로 Antiparallel함

    RT-PCR: reverse transcriptase 이용해 RNA를 DNA로 바꾸어 PCR 반응을 일으키는 것

    Quantitative PCR: 형질전환된 유전자의 발현을 정량적으로 알아보기 위한 방법
    Real-time, or quantitative PCR
    합성 중에 PCR 증폭 생성물을 감지
    Ct (cycle threshold): 형광 신호가 임계값을 넘는 데 필요한 사이클 수
    Ct = 17이 Ct = 18 보다 mRNA가 2배 더 많이 발현
    Internal control: 대부분 발달 단계 및 식물 기관에서 일정하게 발현되는 유전자.
    예) GAPc, ubiquitin 등등

    참고자료

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