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RNA 추출, cDNA 합성 및 qRT-PCR2025.01.181. PCR (Polymerase Chain Reaction) PCR은 DNA의 상보적 가닥에 결합하는 2개의 프라이머를 동시에 사용하여 증폭을 원하는 DNA의 특정 영역만을 in vitro에서 복제, 증폭하는 기술이다. 3단계를 거쳐 DNA를 복제하는데, 변성, 결합, 신장 과정을 반복하여 DNA를 증폭시킨다. 2. RT-PCR (Reverse Transcriptase PCR) RT-PCR은 유전자에서 만들어진 RNA에서 역전사효소를 이용하여 cDNA를 생성한 후, cDNA를 주형 가닥으로 PCR을 수행하여, 유전자의 RNA 발현...2025.01.18
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RT-PCR & qRT-PCR 실험 결과 분석 보고서2025.12.101. RT-PCR (역전사 중합효소연쇄반응) RNA로부터 cDNA를 합성하여 PCR을 수행하는 기법입니다. RNA는 DNA보다 불안정하고 기술적 전문성이 필요하며 비활성화가 어렵기 때문에 cDNA를 사용합니다. 실험에서는 37°C에서 1시간 역전사 반응을 진행했으며, DNA PCR과 달리 단일 온도 조건을 유지하는 이유는 RNA의 안정성을 보호하고 RNase H의 활성을 제어하기 위함입니다. 2. qRT-PCR (정량적 역전사 중합효소연쇄반응) 실시간 PCR을 통해 유전자 발현을 정량적으로 측정하는 기법입니다. SYBR Green ...2025.12.10
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유전발생생물학실험_RT-reaction, qRT-PCR2025.01.131. Reverse transcription Reverse transcription은 RNA를 주형으로 해서 cDNA로서 RNA의 염기순서를 전사하는 반응이다. 이는 레트로바이러스를 생육하기 위해서는 DNA합성이 무조건 필요하다는 연구를 시작으로, 역전사효소를 발견하며 증명되었다. Reverse transcription은 central dogma에서 RNA에서 DNA로 가는것도 있다는 것을 발견한 것이 중요하다. 2. Polymerase Chain Reaction (PCR) Polymerase Chain Reaction은 PCR로 ...2025.01.13
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RT-reaction & qPCR을 이용한 p21 단백질 발현 분석2025.11.171. 역전사 반응(RT-reaction)과 cDNA 합성 역전사효소는 RNA를 주형으로 하여 DNA를 합성하는 효소이며, 결과물인 cDNA는 mRNA의 상보적 DNA이다. cDNA는 전사 가능한 엑손 영역만 포함하고 인트론이 제거되어 있어 genomic DNA와 다르다. RT-reaction에서는 Random Hexamer, dNTPs, RNase inhibitor, Reverse transcriptase 등을 사용하여 mRNA로부터 cDNA를 합성한다. 이 기술은 cDNA 라이브러리 제작과 RT-PCR 등 분자생물학의 핵심 기술에...2025.11.17
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[생명공학] RNA extraction, cDNA synthesis, qRT PCR2025.05.031. RNA extraction RNA를 분리하는 과정에서 가장먼저 첨가해주는 물질이 Trizol이다. Trizol은 phenol과 guanidinium thiocyanate라는 두가지 중요한 성분으로 이루어져있고 이들이 cell을 lysis하고 RNA를 안정화시키는 역할을 한다. 추가적으로 chloroform을 첨가하여 RNA와 다른 물질들을 분리한다. 2. cDNA synthesis cDNA 합성 과정에서는 reverse transcriptase 효소가 핵심적인 역할을 한다. 이 효소는 RNA를 DNA로 역전사하는 기능을 가지고...2025.05.03
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RT-PCR을 이용한 cDNA 합성 및 유전자 발현 분석2025.12.191. cDNA 역전사 역전사효소에 의해 mRNA로부터 상보적인 DNA(cDNA)를 생성하는 과정입니다. cDNA는 전사되고 스플라이싱이 일어난 mRNA와 염기 상보성을 보이며, 발현 가능한 mRNA의 서열과 단백질 정보를 나타냅니다. 역전사효소는 RNA template이 존재해야 DNA 합성 활성을 가지므로, 게놈 DNA 내 전사되지 않는 부분은 제거됩니다. cDNA 합성은 프라이밍, RNA-DNA 하이브리드 형성, 신장 단계를 거칩니다. 2. 역전사효소(Reverse Transcriptase) RNA template로부터 RNA ...2025.12.19
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형질전환 식물 분석 방법 및 유전자 발현 검증2025.12.171. 형질전환 식물 확인 방법 형질전환 식물을 확인하기 위해 항생제 선택, 시각적 선택, GFP 등의 리포터 유전자 발현, GOI 분석(삽입, 복사수, 발현, 멘델 분리) 등의 방법을 활용한다. 이러한 방법들은 형질전환의 성공 여부를 판단하고 형질전환 유전자의 특성을 파악하는 데 필수적이다. 2. PCR 기반 형질전환 유전자 검출 중합효소연쇄반응(PCR)은 형질전환 유전자나 발현을 확인하는 데 사용된다. Forward와 reverse primer를 설계하여 변성(95℃), 프라이머 결합(55℃), 신장(72℃) 단계를 거친다. RT...2025.12.17
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qRT-PCR을 이용한 세포 분화에 따른 유전자 발현 분석2025.12.161. PCR(중합효소연쇄반응)의 원리 및 기술 PCR은 DNA의 특정 부분을 복제하고 증폭하는 분자생물학적 기술로, 변성(90~95℃), 결합(50~60℃), 확장(72℃)의 세 단계를 거쳐 25~30회 반복함으로써 DNA를 기하급수적으로 증폭한다. 프라이머는 18~25nt 길이의 단일가닥 DNA로 특정 DNA 단편과 상보적 서열을 가지며, Taq 중합효소가 뉴클레오타이드를 연결하여 새로운 DNA 분자를 생성한다. 유전자 분석, 감염병 진단, 범죄 수사 등 다양한 분야에서 활용되며 소량의 DNA로부터 수백만 배 이상의 증폭이 가능하...2025.12.16
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식물분자생물학실험 Real-time PCR (Quantitative RT-PCR) 결과보고서2025.01.181. RT-PCR RT-PCR은 RNA 서열을 DNA로 역전사하여 PCR을 통해 증폭하는 기술이다. 이는 RNA 기반 생명체의 유전자 발현 분석에 활용되며, COVID-19 팬데믹 당시 SARS-CoV-2 바이러스 검출에 중요하게 사용되었다. 2. Quantitative RT-PCR Quantitative RT-PCR은 유전자 발현량을 정량화하는 기술로, 실시간으로 형광 신호를 측정하여 유전자 증폭 정도를 확인할 수 있다. SYBR Green과 TaqMan probe 방식이 대표적이며, 각각 장단점이 있다. 3. C3H55 유전자 ...2025.01.18
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RT-PCR 실험 레포트: 원리, 방법 및 결과 분석2025.11.171. PCR(중합효소 연쇄반응)의 원리 및 역사 PCR은 소량의 시료로 DNA를 증폭시켜 대량의 표적 유전 정보를 얻는 방법으로, 1985년 캐리 멀리스에 의해 개발되었다. DNA의 특정 부분을 복제·증폭시키는 기법으로 변성, 결합, 신장의 3단계로 진행되며, 지정 영역의 DNA를 2ⁿ배만큼 증폭시킨다. 현재 생명과학 분야에서 필수적으로 이용되며, 코로나-19 검출 등 다양한 분야에 활용되고 있다. 2. RT-PCR의 종류 및 특징 RT-PCR은 RNA 바이러스 검출을 위해 역전사 반응을 시행하는 방법으로, 1-step RT-PCR...2025.11.17
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