생화학실험 레포트 - 식물 조직으로부터 단백질 추출 및 정량 (Protein extraction & quantification)

소개

생화학실험 수강 당시 작성했던 레포트 이고, 해당 수업 A+ 받았습니다

목차

Ⅰ. Introduction
1) Lowry assay
2) BSA proteins
3) Bradford assay
4) Bio-Rad DC Protien Assay
5) Spectrophotometer

Ⅱ. Experimental materials and Methods

Ⅲ. Results

Ⅳ. Discussion
⑴ 단백질 농도 계산 및 고찰
⑵ Tris-Mg/NP-40 buffer와 E buffer 중 어떤 것이 더 효율적일까?

Ⅴ. References

본문내용

Ⅰ. Introduction
-Experiment purpose :
지난 실험 시간에는 단백질 추출을 위한 EZ buffer, Tris-Mg/NP-40 buffer를 제조하였다. 이번 시간에는 잎 조직에서 제조한 buffer들을 이용하여 total proteins을 분리하고, 잎 조직으로부터 분리한 단백질의 양을 Bio-Rad DC Protien Assay을 이용하여 정량하고자 하였다.

-Experiment theory :
⑴ Lowry assay는 단백질 정량 분석법 중 하나로, 용액에 있는 단백질뿐만 아니라 건조된 시료에서도 이용될 수 있다. 이 방법은 Folin-Ciocalteau 시약에 의한 단백질과 알칼리성 구리와의 반응으로, 포스포몰리브덴산-포스포텅스텐산 염들이 단백질에 있는 티로신과 트립토판들에 의한 환원 반응으로 생성된다. 두 아미노산의 함량은 단백질의 종류에 따라서 다르므로 1mg의 단백질에 대한 색의 세기가 일정하지 않고 standard curve을 결정하는 데 사용한 단백질이 나타나는 색의 세기와 다를 수 있다. 그럼에도 이 방법은 단백질을 정제하는 과정에 있어서 단백질의 함량변화를 측정하는데 아주 유용하게 쓰인다.

⑵ BSA protein은 Bovine serum albumin의 약자로, 소로부터 유래된 serum albumin protein이다. 주로 단백질 농도의 기준으로 사용된다.

⑶ Bradford assay은 protein assay 방법 중 가장 빠르고 수행하기 쉬워 단시간에 여러 sample을 테스트할 수 있다.

참고자료

· 김해신. (2014). 생화학 실험서. (2판). 서울: 월드사이언스
· 김영희. (2004). 생화학 실험서. 서울: 아카데미서적
· 한국생화학회. (1997). 실험생화학. (3판). 서울: 탐구당, p.177