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세포 용해를 통한 단백질 추출2025.01.021. 세포 용해 방법 세포 용해(또는 세포 파괴)에 사용되는 다양한 물리적, 화학적 방법을 살펴보고, RIPA 용해 완충액을 사용하여 세포를 파괴하고 세포 단백질을 얻을 수 있다. RIPA 용해 완충액은 세포막, 핵막, 단백질 결합을 모두 분해할 수 있는 강한 계면활성제를 포함하고 있어 세포질, 핵 단백질 등 다양한 단백질을 추출할 수 있다. 2. 단백질 추출 과정 배양 중인 MCF-7 세포를 DPBS로 세척하고 세포 긁개로 세포를 모아 원심분리하여 세포 펠릿을 얻었다. 이 세포 펠릿에 RIPA 용해 완충액을 처리하여 세포를 용해하...2025.01.02
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[생화학실험] A+, 세포파쇄 및 단백질 정량법 실험2025.01.031. 세포막 구조 동·식물(진핵세포)의 세포막은 단백질과 인지질로 구성된 이중막 구조이며, 박테리아(원핵세포)의 세포막도 이와 유사한 구조를 가지고 있다. 단백질은 온도, pH 등의 요인에 의해 구조와 기능이 변화할 수 있다. 2. 세포 파쇄 방법 세포막을 파쇄하여 세포 내 단백질 및 대사체를 안정적으로 추출하는 다양한 방법이 있다. 초음파 파쇄, 칼날 분쇄, 막자와 막자사발 분쇄, 효소 파쇄, 삼투압 파쇄, 알칼리 처리, 압착법 등이 있으며 각각의 원리와 특징이 다르다. 3. 단백질 추출 및 정량 단백질은 온도, pH 등의 요인에...2025.01.03
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단백질의 분리(생화학실험)2025.01.161. 단백질 단백질이란 생화학에서 생물의 몸을 구성하는 고분자 유기 물질이다. 수많은 아미노산의 연결체로 이루어져 있으며, 생물체 내의 구성 성분, 세포 안의 각종 화학반응의 촉매 역할(효소), 항체를 형성하여 면역을 담당하는 등 여러 가지 형태로 중요한 역할을 수행한다. 2. 단백질 추출 단백질을 추출하기 위해서는 버퍼를 넣고 세포나 조직을 깨뜨려줄 필요가 있다. 세포 및 조직을 깨트리는 방법에는 homogenization, sonication, french pressure cell, grinding, glass bead vort...2025.01.16
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생화학 실험 보고서 - 단백질 분리2025.01.271. 단백질 분리 이번 실험에서는 MCF-7 세포를 이용하여 동물 세포에서의 단백질 분리 과정을 이해하고 단백질 분석 및 연구를 위한 준비를 하였습니다. 단백질 분리를 위해서는 세포를 깨뜨리고 안정적인 버퍼 환경을 만드는 것이 중요합니다. 다양한 방법으로 세포를 파괴할 수 있으며, 이번 실험에서는 scraper를 사용하여 MCF-7 세포를 깨뜨리고 RIPA 버퍼와 protease 억제제를 첨가하여 단백질을 추출하였습니다. 최종적으로 원심분리를 통해 상층액에 분리된 단백질을 -80°C에 보관하였습니다. 1. 단백질 분리 단백질 분리는...2025.01.27
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연세대학교 생화학실험(1) 6주차 Peptide Mass Fingerprinting In-gel Digestion2025.05.041. Peptide Mass Fingerprinting (PMF) Peptide Mass Fingerprinting (PMF)은 단백질 동정을 위한 기술로, 단백질을 효소로 절단하여 생성된 펩타이드의 질량을 측정하고 데이터베이스와 비교하여 단백질을 식별하는 방법입니다. 이 기술은 SDS-PAGE를 통해 분리된 단백질 밴드에서 시작되며, 밴드를 절단하고 효소로 소화하여 생성된 펩타이드의 질량을 질량분석기로 측정합니다. 이렇게 얻은 펩타이드 질량 데이터를 데이터베이스와 비교하여 단백질을 동정하게 됩니다. 2. In-gel Digesti...2025.05.04
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플라스미드 DNA 추출 예비 레포트2025.01.031. 플라스미드 DNA 추출 이 예비 레포트는 플라스미드 DNA 분리 방법을 이해하고 순수한 플라스미드 DNA를 추출하는 실험을 설명합니다. 플라스미드는 세균의 염색체 외부에 존재하는 독립적으로 증식할 수 있는 DNA 분자로, 유전자 클로닝, 유전자 전달, 유용 단백질 생산 등에 활용됩니다. 플라스미드 DNA 추출 방법에는 크기 차이와 구조 차이를 이용하는 방법이 있으며, 주로 알칼리 변성법을 사용합니다. 이 실험에서는 세포 용해, 단백질 제거, DNA 정제 등의 과정을 거쳐 순수한 플라스미드 DNA를 얻는 방법을 설명하고 있습니다...2025.01.03
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Cell harvest and protein assay2025.01.231. Cell harvest 세포 배양 시 adherent cell과 suspension cell로 구분할 수 있으며, adherent cell을 harvest하는 방법에는 화학적 방법(trypsin, accutase 사용)과 물리적 방법(scraper 사용)이 있다. 이번 실험에서는 물리적 방법인 scraper를 사용하여 adherent cell을 harvest하였다. 2. Protein extraction 세포 내 단백질을 추출하기 위해 lysis buffer와 phosphatase/protease inhibitor를 사용하여 ...2025.01.23
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Protein Regulation2025.01.181. Auxin-induced degron system Auxin-induced degron system은 특정 target protein을 원하는 상황에서 제거하기 위해 사용되는 방식으로, AID가 결합된 protein과 OsTir1이 같이 존재할 경우에 IAA(auxin)가 존재하지 않을 경우에는 정상적으로 protein이 존재할 수 있지만, IAA가 존재할 경우 IAA가 AID와 OsTir1을 연결하는 bridge 역할을 하고 polyubiquitin 구조가 형성되며 이는 이후 proteosome에 의해 빠르게 분해되어 pro...2025.01.18
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크로마토그래피에 의한 단백질 정제 탐구2025.01.291. 단백질 정제 단백질 정제는 정제된 단백질을 분리하고 얻는 과정이다. 유전자 재조합 이후, 단백질 발현 과정을 거쳐 단백질 정제 단계에서 단백질을 정제할 수 있는 다양한 크로마토그래피 기법이 있다. 이러한 기술을 통해 특정 단백질을 정밀하게 분리할 수 있으며 바이오 의약품, 생명공학 및 기초 연구 분야에 적용하여 활용될 수 있다. 2. 크로마토그래피 기법 크로마토그래피는 단백질 정제에 사용되는 다목적 기술로, 전하 기반 분리를 위한 이온 교환, 특정 결합 상호작용을 활용한 친화성, 크기 기반 분리를 위한 크기 배제가 포함된다. ...2025.01.29
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단백질 풀림 예비실험2025.05.091. 단백질 구조 단백질은 20종류의 아미노산이 결합하여 이루어진 고분자 화합물입니다. 단백질은 1차 구조, 2차 구조, 3차 구조, 4차 구조로 이루어져 있으며, 이러한 구조를 유지하기 위해서는 다양한 분자 내 힘과 상호작용이 필요합니다. 단백질의 구조가 변화하면 단백질의 기능도 변화하게 됩니다. 2. 단백질 풀림 단백질은 특정 구조를 유지할 때만 기능을 수행할 수 있습니다. 하지만 온도 상승, pH 변화, 극성/비극성 물질의 첨가 등 다양한 요인에 의해 단백질의 구조가 풀리게 됩니다. 단백질 풀림 여부는 닌히드린 반응, 뷰렛 반...2025.05.09
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