Transformation & Blue-White screening A+ 레포트

소개

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목차

1. Title
2. Name
3. Purpose
4. Materials
5. Methods
6. Results
7. Discussion
8. References

본문내용

이번 Transformation & Blue-White screening 실험에서는 TA cloning의 결과물인 ligation reaction에 들어있는 plasmid DNA를 E.coli에 chemical한 방식으로 transformation 해보았다. 이후 ampicillin과 X-gal이 들어있는 LB plate에서 배양하여 Blue-White screening을 실시함으로써, 형질전환 된 colony 중 재조합된 plasmid DNA를 포함하는 cell을 선별해보았다.
우선 Transformation이란 원래 세포가 가지고 있던 것과 다른 종류의 유전자가 있는 DNA 조각 또는 플라스미드가 세포에 도입되어, 원래의 성질과는 다른 새로운 유전형질을 추가적으로 얻게 되는 현상을 의미한다. 이때 자연계에서 형질전환은 세균 성장 곡선에서 정체기에 들어갈 때, 세포의 밀도가 높거나 영양이 결핍된 상황에서 주로 일어나기 때문에 박테리아가 유전정보를 얻는 주된 과정은 아니다. E.coli를 포함한 대부분의 bacteria는 일반적인 조건에서 제한된 양의 DNA만을 세포 내부로 도입하므로, 이러한 bacteria를 효과적으로 형질전환하기 위해서는 화학적이거나 물리적인 처리를 통해 DNA 도입능력을 강화해줘야 한다. 이러한 처리를 거친 세포는 수용능이 있다고 말하며, competent cell(수용성 세포)이라고 부른다. 이번 실험에서 사용한 competent cell은 Top10 E.coli로 고효율 cloning과 plasmid 증식에 이상적이라는 특징을 지녀, high-copy plasmid의 안정적인 복제가 가능하다는 장점이 있다. Bacteria가 차가운 온도에서 2가 양이온이 포함된 용액에 노출되면 DNA에 대해 수용능을 가진 competent cell로 변할 수 있는데, 이때 2가 양이온인 Ca2+을 공급하기 위해서 CaCl2를 이용한다.

참고자료

· 이병무, 『유전자 클로닝과 DNA 분석』, 월드사이언스(2017), 75-82p.
· 이정주, 『유전학원론』, 월드사이언스(2013), 373-374p.
· 이종호, 『의생명과학 실험서 상권』, 라이프사이언스(2021), 18-20,157-161,172,173,190,191p.
· “형질전환”, 분자·세포생물학백과, 한국분자·세포생물학회
· “Clean bench", 미생물학백과, 한국미생물학회
· “Ampicillin", 미생물학백과, 한국미생물학회