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DNA 연결 및 형질전환, 플라스미드 추출 및 제한효소 절단2025.11.171. T4 DNA Ligase와 DNA 연결(Ligation) T4 DNA ligase는 T4 박테리오파지에서 유래한 효소로, DNA의 3'-OH와 5'-P 사이에 phosphodiester 결합을 형성하여 DNA를 연결한다. Ligation buffer에는 Tris-HCl(pH 7.6), MgCl2, DTT, ATP가 포함되며, 각각 완충작용, cofactor 제공, 환원환경 조성, cofactor 제공의 역할을 한다. Self-ligation 방지를 위해 double-digestion(서로 다른 제한효소 사용) 또는 alkali...2025.11.17
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형질전환과 블루-화이트 스크리닝 실험2025.11.171. 형질전환(Transformation) 형질전환은 외부의 DNA 또는 플라스미드가 세포에 도입되어 새로운 유전형질을 획득하는 현상입니다. 자연계에서는 세균 성장 곡선의 정체기에 주로 발생하지만, 실험실에서는 화학적 또는 물리적 처리를 통해 수용능 있는 세포(competent cell)를 만들어 효율적으로 형질전환을 수행합니다. 본 실험에서는 CaCl2 처리를 통해 TOP10 E.coli competent cell을 준비하고, heat shock 방식으로 플라스미드 DNA를 세포 내로 도입했습니다. 2. 블루-화이트 스크리닝(Bl...2025.11.17
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DNA cloning 방법/enzyme, transformation, selection mark/생화학 보고서2025.01.201. DNA cloning 방법 DNA cloning은 타깃 유전자를 박테리아의 게놈에서 잘라내어 plasmid에 삽입하는 과정입니다. 이 과정에서 restriction enzyme을 사용하여 유전자를 자르고, ligase를 사용하여 유전자를 plasmid에 붙입니다. 이렇게 만들어진 recombinant vector는 박테리아에 형질전환되어 증폭됩니다. 형질전환 과정에서는 열처리를 통해 세포막을 열어 plasmid가 들어가게 하며, 항생제 내성 유전자를 선별 마커로 사용하여 형질전환된 세포를 선별합니다. 2. Enzyme 사용 D...2025.01.20
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Ligation & Transformation 예비레포트2025.11.151. DNA Ligation (DNA 연결) 유전자 클로닝 과정에서 DNA ligase 효소를 이용하여 insert DNA와 vector DNA를 연결하는 실험. 제한효소로 처리된 DNA 말단을 DNA ligase 효소로 연결하여 재조합 DNA를 만드는 과정. 50ng의 vector DNA에 대해 1:1, 1:5, 1:10 등의 비율로 insert DNA를 혼합하고, 37℃에서 1시간 반응시켜 DNA 연결을 수행한다. 2. Bacterial Transformation (박테리아 형질전환) 재조합 DNA를 대장균(CP cell)에 도...2025.11.15
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DNA 연결 및 형질전환 실험 결과2025.11.131. DNA Ligation (DNA 연결) DNA 연결은 DNA 단편들을 DNA 리가제 효소를 이용하여 공유결합으로 연결하는 분자생물학 기법입니다. 이 과정에서 플라스미드와 목적 유전자의 양 끝에 있는 인산디에스터 결합을 형성하여 재조합 DNA를 만듭니다. 적절한 온도와 시간 조건에서 수행되며, 연결 효율은 DNA 농도, 리가제 양, 반응 시간 등에 영향을 받습니다. 2. Transformation (형질전환) 형질전환은 재조합 DNA를 숙주 세포(주로 박테리아)에 도입하는 과정입니다. 화학적 형질전환이나 전기천공법 등의 방법으로...2025.11.13
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DNA 형질전환 실험 결과 및 분석2025.11.141. 형질전환(Transformation) 형질전환은 원래 세포가 가지고 있던 것과 다른 종류의 유전자가 있는 DNA 사슬 조각 또는 플라스미드가 세포들 사이에 침투되어 원래 세포에 존재하던 DNA와 결합하여 세포의 유전형질이 변화되는 분자생물학적 현상이다. 본 실험에서는 재조합된 DNA를 competent cell에 삽입하여 형질전환을 수행하고, ampicillin과 X-gal이 들어 있는 LB plate에서 배양하여 colony를 형성시켰다. 2. 재조합 DNA 선별 방법 클로닝된 DNA 조각이 벡터에 성공적으로 삽입되었는지 확...2025.11.14
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산욕기 간호 가상시나리오: 감염 합병증 사례2025.11.131. 산욕기 감염(자궁내막염) 분만 후 1일째 환자가 38.5°C의 고열, 오한, 발한, 하복부 통증을 호소하였다. 회음부 패드에서 악취가 나는 선홍색 분비물이 확인되었고, 혈액검사 결과 WBC 상승, ESR 및 CRP 증가가 나타났다. GBS(B군 연쇄상구균) 양성으로 확인되어 자궁내막염 의심 진단을 받았다. Cefotaxime 2g 정맥주사와 타이레놀 650mg 경구투약으로 치료하였으며, H/S 1000ml를 125ml/hr 속도로 유지하고 가습 O2 2L/min을 비강캐뉼라로 적용하여 지속적으로 관찰하였다. 2. 산욕기 통증 ...2025.11.13
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다제내성균 환자 보호자를 위한 퇴원 안내문2025.01.061. 다제내성균 다제내성균이란 여러 항생제에 내성을 가진 세균을 말합니다. 이러한 세균은 항생제 치료 과정에서 생기거나 감염된 환자나 오염된 물품을 통해 전파될 수 있습니다. 퇴원 후 일상생활에서 주의해야 할 사항으로는 손씻기, 수건 구분 사용, 식기 및 화장실 공유 자제, 변기 소독 등이 있습니다. 보균 검사는 주기적으로 할 필요는 없지만 재입원 시에는 선별검사와 선제격리가 필요합니다. 1. 다제내성균 다제내성균은 현대 의료 분야에서 매우 심각한 문제로 대두되고 있습니다. 이는 항생제 남용과 오남용으로 인해 발생한 것으로, 이러한...2025.01.06
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그람 염색을 통한 미생물 분류 실험2025.11.131. 그람 염색(Gram Staining) 그람 염색은 미생물을 그람 양성균과 그람 음성균으로 구분하는 기본적인 미생물학 실험 기법입니다. 크리스탈 바이올렛, 아이오딘, 에탄올, 사프라닌을 순차적으로 사용하여 염색합니다. 그람 양성균은 두꺼운 펩티도글리칸 층으로 인해 자색으로 염색되며, 그람 음성균은 얇은 펩티도글리칸 층과 외막 구조로 인해 적색으로 염색됩니다. 이 방법은 세포벽 구조의 차이를 이용하여 미생물을 분류하는 중요한 진단 도구입니다. 2. 그람 양성균과 음성균의 세포벽 구조 그람 양성균의 세포벽은 80~90%가 두꺼운 펩...2025.11.13
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항생제(항균제) 남용으로 발생하는 문제점과 예방 및 대처 방안2025.01.131. 항생제 내성 발생 항생제 내성은 항생제를 과도하게 사용함에 따라 세균이 저항성을 획득하여 항생제에 대한 효과를 상실하는 현상이다. 이는 세균이 자신의 유전자를 변이시켜 항생제에 대한 저항성을 발달시키는 과정으로 진행된다. 항생제 내성은 치료에 어려움을 초래할 뿐만 아니라, 심각한 감염의 발생률을 높일 수 있다. 내성을 가진 세균은 일반적인 항생제로 치료되지 않으며, 이에 대처하기 위해서는 보다 강력하고 부작용이 적은 항생제가 필요하다. 2. 세균의 생태계 파괴 항생제의 사용은 종종 유익한 세균과 함께 해로운 세균을 모두 죽일 ...2025.01.13
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