유전발생생물학실험_qRT-PCR

목차

1. 서론

2. 재료 및 방법
1) 재료
2) Reverse Transcription reaction 방법
3) qRT-PCR(Quantitative Real Time PCR) 방법

3. 결과

4. 논의

본문내용

central dogma에 따르면, 한 세대에서 다음 세대로의 유전정보 전달은 DNA에서 DNA 로, DNA에서 RNA로 유전정보를 전달하는 전사, RNA에서 단백질로 유전정보를 전달 하는 번역의 과정으로 정보가 흐른다 (Snustad·Simmons, 2008).
리보솜에서 번역되는 RNA를 mRNA라 부른다 (Snustad·Simmons, 2008). mRNA는 pre-mRNA의 intron 제거와 5’7-methyl guanosine cap과 poly A tail의 첨가로 만 들어진다 (Snustad·Simmons, 2008).
reverse transcriptase(RT)는 RNA 주형을 이용하여 DNA를 합성하는 DNA 중합효소다 (Watson et al., 2010). 이는 DNA에서 RNA로의 생물학적 정보전달의 정상적 경로에 대해 역방향으로 RNA를 DNA로 전환시키기 때문에 ‘레트로’ 인자라 한다 (Watson et al., 2010). 이렇게 합성된 DNA를 cDNA라 부르며, gDNA(genomic DNA)와 달리 intron은 없고 exon만 존재하게 된다.
PCR(polymerase chain reaction)은 인간 게놈프로젝트의 해석 속도를 빠르게 한 방 법으로 한 개의 세포(소량의 DNA)만 있어도 DNA를 증폭할 수 있다 (김영희, 2008).

<중 략>

2. 재료 및 방법

1) 재료

Random Hexamer, dNTP, RNase inhibitor, Reverse transcriptase, RNA(senescent cell, proliferating cell), primer(p21, β-actin), SYBR Green Mastermix

2) Reverse Transcription reaction 방법

① (1 X 6)uL Random hexamer(200nm/uL)와 (1 X 6)uL 10mM dNTPs를 섞는다.

참고자료

· 김영희. 2008. 분자생물학실험서. 월드사이언스, pp.157-160.
· Marisa et al. 2005. Real-time PCR for mRNA quantitation. Biotechniques 39, pp.75-80.
· Rocha et al. 2015. Real Time PCR: the Use of Reference Genes and Essential Rules Required to Obtain Normalisation Data Reliable to Quantitative Gene Expression. Journal of Molecular Biology Research 5, pp.45-55.
· Shtutman et al. 2017. cellular model of p21-induced senescence. Methods Mol Biol. pp.31-32.
· Snustad·Simmons. 2008. 유전학원론. 월드사이언스, pp.280-283.
· Tropp. 2016. 핵심분자생물학. 월드사이언스, p.137.
· Watson et al. 2010. 왓슨 분자생물학. 바이오사이언스, p.340,