Ⅰ. 서론우울증은 의욕 저하와 우울감을 바탕으로 인지 및 정신 신체적 증상을 일으켜 일상기능의 저하를 가져오는 질환이다. 우울증 환자들은 우울한 기분을 비롯한 쾌감 상실, 집중력 저하, 과민성, 수면장애 그리고 식욕부진 등의 다양한 증상이 나타난다. 우울증의 요인은 크게 생화학적 요인, 유전적 요인, 환경적 요인이 있다. 우울증 연구의역사와 우울증의 유전적 요인에 대해 이야기하려 한다. Ⅱ. 본론우울증의 연구는 1950년대에 시작되었다. 고혈압 치료제인 reserpine을 복용한 환자중 일부가 심각한 우울증 증상을 나타낸다는 발견으로부터 시작되었다.
세포 배양은 생물체로부터 분리한 세포를 분리하여 배양하는 과정이다 (강영희, 2008). 생체조직을 무균적으로 선발해서 트립신이나 프로나아제 등의 소화효소로 처리하여 단세포로 분리하여 초대배양을 한다 (강영희, 2008). 또 계대중인 세포계 나 세포주를 같은 효소처리로 분산시켜 얻어낸 단세포를 증식배지에 이식, 접종하 여 다음의 계대배양을 한다 (강영희, 2008). 초대배양세포는 정상성질을 갖고 있으 나 계대함에 따라 증식능, 염색체, 형태 등의 변화(형질변환)를 수반하여 종양성을 갖게 된다 (강영희, 2008). 그 세포의 유래조직에 있던 분화기능은 때로는 소실하 기도 한다. 최근에 이 분화기능을 유지한 세포주가 다량으로 수립되고 있다 (강영 희, 2008). 본 실험에서 사용하는 세포주는 HeLa cell로, 사람의 자궁경부암 조직 에서 얻어낸 세포주로 현존하는 인체에서 유래한 조직배양주 중 가장 오래 전에 분 리한 것이다 (강영희, 2008).단백질체는 유전체에 의해 암호화된 모든 단백질 세트, 혹은 어떤 생물체에 존재하 는 모든 단백질 총체를 의미한다 (Clark·Pazdernik, 2014). 많은 단백질은 다른 단백질들에 의해 가공되고 수정된다 (Clark·Pazdernik, 2014). 따라서 최종 단백 질 총체는 성장 조건에 따라 변하는 단백질 간의 복잡한 상호작용에 의존한다 (Clark·Pazdernik, 2014). 유전자 발현을 종종 mRNA를 추적하여 조사하지만, 그것 이 최종 유전자 산물인 단백질의 양과 활성도에 일치하는 것은 아님으로 이들을 추 적할 필요가 있다 (Clark·Pazdernik, 2014).세포에서 원하는 단백질을 얻기 위해서는 적합한 방법을 선택해야 한다. 세포로부 터 단백질을 추출하는 방법에는 homogenization(물리적 힘을 가해 파쇄), 초음파 처리, 급속동결과 용해를 수회 반복하여 세포막을 손상시킨 후 세포를 파쇄하는 방 법, 계면활성제를 사용하여 세포막을 포함한 주성분을 모아 추출하는 방법이 있다 (강전아인·미야자키, 2017). 본 실험에서는 계면활성제를 사용한 방법을 활용한 다.
노화(aging, senescence)는 생존과 번식에 필요한 생리적 기능이 시간에 따라 퇴보 하는 과정이다 (Gilbert, 2015). 세포노화 (cellular senescence)는 세포 분열이 중지된 상태를 말한다 (Campisi·Fagagna, 2007). 그리고 이는 celluar ageing, replicative senescence라고도 불린다 (Campisi·Fagagna, 2007). 세포노화는 ROS 에 의한 산화 스트레스, 텔로미어 단축 및 복제에 의해 가속화될 수 있다 (McDornld, 2017). senescene cell은 세포 분열의 정지, 세포 기능의 변화(DNA 복 제, RNA 합성 관련 단백질 감소, 짧은 텔로미어), 비기능성 단백질의 증가, 핵의 크기 및 다핵성 세포의 증가 등의 특징을 갖는다 (McDornld, 2017).
Immunofluorescence(IF)는 형광단으로 태그된 특정 항체를 통해 세포 현탁액, 배양 세포, 조직 또는 전체 유기체, 특정 단백질과 같은 많은 구성 요소를 시각적으로 관찰하는 기술이다 (Im et al., 2019). 이는 많은 질병 연구, 약물 개발에서 이용 되고 있다 (Im et al., 2019).IF는 다음과 같은 과정으로 이루어진다. 먼저, 세포를 고정하고, permablization을 통해 antibody가 결합할 수 있게 한다 (Donaldson, 2001). 비특이적 결합을 막기 위해 blocking 과정을 거친 후, fluorescent-tagged antibody과 원하는 target에 직접 붙는 방법인 Direct Immunofluorescence(DIF) 혹은 1차 항체, 2차 항체를 활 용하여 target image를 획득하는 indirect immunofluorescnece 방법이 있다 (Donaldson, 2001; Odell·Cook, 2013). DIF의 경우, 감염된 조직같은 nonantibody target을 탐지하는데 이용될 수 있다 (Odell·Cook, 2013). 비록, DIF의 경우 빠르 고 꽤 정확하지만, 제한된 항체만이 특정 target에 결합할 수 있기 때문에 Indirect immunofluorescence를 주로 사용한다 (Odell·Cook, 2013).