전기영동

소개

"전기영동"에 대한 내용입니다.

목차

1. Title

2. Purpose

3. Materials

4. Methods

5. Results

6. Discussion
1) 전기영동법의 원리
2) DNA 전기영동 결과 분석 및 비교 & 밴드의 끌림이 일어난 원인 파악
3) 플라스미드 DNA

7. Projects
1) Serial dilution에 대해 조사하시오.
2) 본 실험에서는 사용하지 않았지만, EtBr이 무엇인지 조사하시오 (전기 영동에서의 역할, toxic한 이유)

본문내용

4. Purpose : Agarose gel의 구성과 전기영동의 의미를 이해하고 DNA의 크기 및 구조에 따른 결과 차이를 이해한다.

5. Materials : PCR product, 6X loading dye, micro pipette, tip, tank, agarose, EtBr, stirrer, magnetic bar, 플라스크, DW, 1X TAE buffer, size marker

6. Methods
< 1% Agarose gel 만들기 >
① 1× TAE 용액 100㎖에 Agar를 1g을 섞어서 1%로 만든다.
② 전자레인지를 사용하여 열을 가해서 완전 용해시킨다(또는 magnetic bar와 stirrer를 이용하여 녹일 수 있으나, 전자레인지를 활용하는 것이 제일 용이하다).
③ EtBr를 Agarose gel 용액에 1X만큼 넣어준다(EtBr는 Sample, Gel, 별도 염색하는 경우가 있으나, 가장 효과적인 방법은 gel에 넣어주는 것으로 본다).
④ 뜨거운 것을 약간 식힌 후 틀에 부어준다.
⑤ comb을 끼워준다.
⑥ 완전하게 굳으면 틀에서 떼어내고 1× TAE 용액에 담가 보관한다.

<중 략>

<전기영동>
① Well의 가장 왼편에 size marker를 건다.
② well의 가장 왼편에 loading dye와 DNA를 섞어서 주입한다.
(6X loading dye 1 ㎕ 와 DNA 6 ㎕를 혼합)
③ 전기를 50mV-100mV를 걸어준 후 20분 정도 기다린다.
④ DNA를 UV를 통해 확인한다.

※ DNA loading dye
Agarose의 well에 DNA를 넣어줄 때 DNA를 무겁게 하여 agarose의 홈으로 이동하여 하며 푸른빛을 띠면서 DNA가 전기영동 된 정도를 알 수 있다.
ⓐ DNA 분자의 크기가 클수록 느리게 이동한다.
ⓑ Agarose의 농도가 높을수록 느리게 이동한다.

참고자료

· 네이버 지식백과, 연속희석(법) serial dilution (생명과학대사전, 초판 2008, 개정판 2014.강영희) (2021.05.10.) https://terms.naver.com/entry.naver?docId=2693098&cid=60261&categoryId=60261
· Anupama Sapkota, Microbe Notes, Basic Microbiology » Serial dilution- definition, formula, calculator, procedure, uses, (May 27, 2020)
· 『전기영동 최신 프로토콜』, 편집부(강호일 역), 월드사이언스, 2006, p.14-25
· 네이버 지식백과, 두산백과, 브로민화 에티듐 (2021.05.10.) https://terms.naver.com/entry.nhn?docId=4357380&cid=40942&categoryId=32308
· 네이버 지식백과, 두산백과, 겔전기영동 (2021.05.10.) https://terms.naver.com/entry.nhn?docId=1261192&cid=40942&categoryId=32251
· 네이버 지식백과, 미생물학백과, 겔 전기영동 (2021.05.10.)
· https://terms.naver.com/entry.nhn?docId=5144700&cid=61232&categoryId=61232
· 네이버 지식백과, 분자 세포생물학백과, 젤 전기영동 (2021.05.10.) https://terms.naver.com/entry.nhn?docId=5751214&cid=61233&categoryId=61233
· 이복주 (한국기술교육대학교 컴퓨터공학과 ) ; 문혁 ( 한국기술교육대학교 컴퓨터공학과 ) ; 박종훈 ( (주)넷코덱 ) ; 최영규 ( 한국기술교육대학교 컴퓨터공학과), “PCR Gel 전기영동 이미지 분석을 위한 레인검출 및 추적 알고리즘”, 한국정보처리학회 2017년도 춘계학술발표대회 2017 Apr. 27 , 2017년, pp.577 - 580