일반생물학실험 기질농도, 온도, pH에 따른 효소활성 비교 실험

소개

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목차

1.Abstract

2.Introduction
(1)효소
(2)기질 고갈과 효소 포화
(3)기질농도, 온도, pH에 따른 효소의 활성
(4)활성화 에너지
(5)β-galactosidase
(6)ONPG(Ortho-nitrophenyl-β-D-galactoside)

3.Materials & Methods

4.Result

5.Discussion

본문내용

이번 실험에서 생체촉매인 효소에 대해서 탐구했다. 효소는 기질과 효소-기질 복합체를 만들고, 기질을 반응물로 바꿀 때 화학반응에 필요한 최소한의 에너지인 활성화 에너지를 감소시키는 역할을 한다. 효소는 효율성과, 특이성을 매우 높게 가지고 있었다. 효소는 효소포화 상태에서 반응속도를 일정하게 유지했고, 기질고갈 상태에서는 더 이상 반응을 하지 않았다. 효소는 온도와 pH에 따라서 활성정도와 반응 속도가 달라졌다. 실험에서는 이당류인 Lactose를 가수분해하는 β-galactosidase를 효소로, O-nitrophenol과 galactose가 합쳐져서 만들어진 ONPG를 기질로 사용했다. ONPG는 분해되어서 ONP가 되었을 때 황색을 나타내며, 420nm에서 최대 흡광도를 가졌다. 실험을 할 때, 우리는 Micro test tube, Na-Phosphate buffer pH 3, 5, 7.3, 9, 12, ONPG, water bath, β-galactosidase, 1M Na2CO3, 1000p pipette, 200p pipette, spectrophotometer, plastic cuvette을 준비했다. 첫 번째 실험은 기질 농도를 100, 250, 500μM로 맞춰준 sample을 각각 0, 5, 10, 15분 반응을 시켰고, 두 번째 실험에서는 모두 7.3pH로 일정하지만 각각 4도, 상온, 37도, 60도, 90도에서 10분간 반응한 시켰다. 마지막으로는 같은 온도에서 pH를 3, 5, 7.3, 9, 12로 다르게 해서 반응한 후 spectrophotometer을 이용해서 흡광도를 측정했다. 실험을 통해서 얻은 최적값은 25도씨, pH7.3으로 이론값과 차이가 보였다. 이것은 실험 과정에서 시간을 일정하게 통제하지 못했기 때문일 것이다. 그리고 만약 실험을 한 ONPG농도를 다르게 하거나, 반응시간을 다르게 해준다면 기질이 고갈되거나 효소가 포화되기 전까지는 농도가 높을수록, 반응시간이 길수록 흡광도가 크게 나타날 것이다.

참고자료

· Reece, taylor, (2005), Campbell biology, 7th edition, pearson, p83-85
· Theodore L.Brown(2017), Chemistry the central science, Fourteenth edition, pearson, 647p- 649p
· https://terms.naver.com/entry.nhn?docId=2313578&cid=60227&categoryId=60227
· (accessed 2019.09.25)