단백질 정량분석(BCA, Bradford assay)(A+보장, 출처가 확실한 양질의 다양한 자료, 검토를 거쳐 더욱 완벽해진 내용)

소개

"단백질 정량분석(BCA, Bradford assay)(A+보장, 출처가 확실한 양질의 다양한 자료, 검토를 거쳐 더욱 완벽해진 내용)"에 대한 내용입니다. Assignment에는 교수마다, 학기마다, 수업시간마다 다르게 주어지는 과제에 대한 해답을 적어놓아야 합니다. 당시 저는 아무런 과제를 받지 않았기에 공백으로 둔 것이며, Assignment는 그저 실험 보고서 양식을 지키기 위해 올려둔 것입니다.

목차

1. Subject

2. Date

3. Purpose

4. Introduction
1) Bradford assay
2) BCA assay
3) spectrophotometer를 이용한 단백질 흡광도 측정 방법 (흡광 계수)

5. Material & Method
1) Bradford assay
2) BCA assay
3) Nanodrop

6. Result
1) Bradford assay
2) BCA assay
3) Nanodrop

7. Discussion

8. Reference

9. Assignment

본문내용

1. Subject - 단백질 정량분석(BCA, Bradford assay)

< 중 략 >

4. Introduction
1. Bradford assay
단백질 정량분석에 많이 사용하는 방법. Coomassie brilliant blue G250라는 색소가 단백질과 비공유 결합하여 그 결과 흡수 피크가 465nm에서 595nm로 이동하는 것을 이용한 정량법. 이 결합은 정량적이며 단백질의 아미노산 조성 변화에 따라 큰 차이를 보이지 않음. 따라서 595nm에서의 흡광도는 단백질의 농도에서 비례.

1) 원리
Coomassie brilliant blue G250라는 색소가 단백질과 비공유 결합하여 그 결과 흡수 피크가 465nm에서 595nm로 이동하는 것을 이용한 정량법. Coomassie Brilliant Blue G-250 염료는 음이온(파란색), 중성(녹색) 및 양이온(빨간색)의 세 가지 형태로 존재. 노출된 단백질의 소수성 부위는 염색약과 반데르발스 힘으로 비공유 결합을 이룸. 양전하를 띠는 아민(amine)기는 염색약의 음전하를 띠는 부위(카르복실기)와 가깝게 위치하게 됨. 아민기와 염색약의 음전하를 띠는 부위간의 이온 결합(ionic bond)은 염색약과 단백질의 결합을 더욱 강화시키는 역할을 함. 단백질의 결합은 쿠마시블루 염색약의 파란 색 형태를 안정시킴. 따라서 단백질-염색약 복합체의 수는 단백질 농도와 비례하며, 흡광도와 관련이 있음. 단백질과 결합된 쿠마시블루 염색약은 595nm 파장의 빛을 가장 잘 흡수. 단백질과 결합하지 않은 양이온 형태의 염색약은 빨간색이나 초록색을 띰. 단백질과 결합하게 되면 염색약은 음전하와 파란색을 띰. 595nm에서의 흡광도는 염색약과 단백질이 더욱 많이 결합할수록 높아지고, 이는 시료의 단백질 농도를 알 수 있게 함.

2) 장점
① 다른 단백질 정량법과는 다르게, Bradford 단백질 정량법은 단백질 시료와 함께 있는 다른 화학 물질에 의한 간섭이 적음.

참고자료

· “bradford assay”, wikipedia, 2020.09.16., https://en.wikipedia.org/wiki/Bradford_protein_assay
· “bradford assay”, bio-rad, 2020.09.16., https://www.bio-rad.com/featured/en/bradford-assay.html
· “bradford assay”, thermofisher, 2020.09.16., https://www.thermofisher.com/kr/ko/home/life-science/protein-biology/protein-assays-analysis/protein-assays/bradford-assays.html
· “BCA assay”, wikipedia, 2020.09.17., https://en.wikipedia.org/wiki/Bicinchoninic_acid_assay
· “BCA assay”, thermofisher, 2020.09.17., https://www.thermofisher.com/kr/ko/home/life-science/protein-biology/protein-assays-analysis/protein-assays/bca-protein-assays.html
· “BCA assay”, koramlabtech, 2020.09.17., http://www.koramlabtech.co.kr/web/bbs/board.php?bo_table=21&wr_id=37&page=
· “lowry-folin”, wikipedia, 2020.09.17., https://en.wikipedia.org/wiki/Lowry_protein_assay -
· “Spectrophotometer 매뉴얼”, s-connect, 2020.09.18.,http://www.s-connect.co.kr/innovativebusiness/file/Alphalook%20manual_kor_1227.pdf
· “spectrophotometer”, thermofisher, 2020.09.18.,http://fg.cns.utexas.edu/fg/course_notebook_appendix_ii_files/Spectronic_20_D.pdf
· “spectrophotometer를 이용한 단백질 흡광도 측정”, afrontie, 2020.09.18.,https://www.afrontier.net/laboratory/product/item2.php?it_id=1580790657
· “spectrophotometer를 이용한 단백질 흡광도 측정”, kocw, 2020.09.18.,http://elearning.kocw.net/document/region/2010/09/01/09_01_07_test.pdf