분자생물생화학실험(western blotting)

소개

"분자생물생화학실험(western blotting)"에 대한 내용입니다.

목차

Ⅰ. 서론
Ⅱ. 실험재료 및 방법
Ⅲ. 결과
Ⅳ. 논의
Ⅴ. 참고문헌

본문내용

Ⅰ. 서론
Western blotting이란, SDS PAGE를 비롯한 Electrophoresis의 높은 분리능을 이용하여 단백질을 분리해내는 것부터, 분리해낸 단백질을 새로운 곳으로 옮겨주는 Transfer (blotting) 그리고 항원-항체 반응의 높은 특이성을 사용하여 원하는 단백질을 찾아내는 모든 과정을 통틀어 말하는 것이다(Kang, 2007).
Western blotting을 하기 위해서는 우선 단백질 혼합물로부터 특정 단백질을 검출하기 위해서 전기영동을 이용하여 순수하게 크기별로 분리해야한다.
하지만 전기영동이란, 하전 된 입자가 전기장에서 반대 전하의 전극 쪽으로 이동한다는 것에 기초하며, 전하, 모양, 크기 등에 따라 이동성이 다르다. 따라서 단백질을 전기영동하면 여러 요인이 복합적으로 작용하여 분리가 된다(Kang, 2006).

<중 략>

Ⅳ. 논의
총 9가지의 실험을 진행하였으며, 이 실험을 통해 Western blotting의 전 과정과 그 과정에서 일어나는 현상들, 그리고 recombinant gene에서 만들어지는 Protein을 확인하여 이 현상이 가능하게 되는 원리에 대해 알아보았다.
우선 7주차 실험 <그림 1>을 보면 gel의 모양이 평평하지 않은 상태인 것을 확인할 수 있는데 이에 대한 원인은 2가지 정도로 추론할 수 있다. 첫 번째로는 Plate를 gel을 만들기 전에 washing해야 하는데 이를 하지 않아서 생긴 현상일 수 있고, 두 번째로는 실험 시 APS와 TEMED를 과량 넣어주었기 때문에 gel이 빨리 굳게 되는데 이 gel이 3번째로 분주한 gel이기 때문에 이미 굳는 과정이 진행 중에 만들어졌기 때문에 이러한 현상이 나타난 것이라고 볼 수 있다.
Stacking gel을 보면 Plant를 건 레인에 밴드가 나타나는데 이는 초록빛을 띠며, 분자량이 매우 큰 것으로 보아 엽록체라고 추측할 수 있다.

참고자료

· Watson, James. D., A. Baker. Tania, P. Bell. Stephen, Gann. Alexander, Levine. Michael, and Losick. Richard. 2013. Molecular Biology of the Gene. 7th Ed., PEARSON, pp176-177
· Kang, H. I., 2006. 전기영동최신프로토콜. 월드사이언스, pp142-152
· Kang, H. I., 2007. 단백질실험핸드북. 월드사이언스, pp152-157
· Campbell, Mary. K. and O. Farrell. Shawn. 2009. Biochemistry. 6th Ed., THOMSON, pp128-129
· Reece, J. B., L. A. Urry., M. L. Cain., S. A. Wasserman., P. V. Minorsky., and R. B. Jackson. 2012. 캠벨 생명과학. 9th Ed., 바이오사이언스, p936
· http://www.motifolio.com/6111177.html