[A+ 리포트] Western blot 2 (Antibody & Detection(ECL))

소개글

본 리포트는 western blot의 과정 중에서도 Antibody와 Detection에 관한 구체적인 과정 및 내용이 담겨 있습니다.

참고하시어 좋은 결과 쟁취하시기 바랍니다.

목차

1. Date

2. Title

3. Purpose

4. Materials

5. Method
가. Antibody (항원-항체 반응)
나. Detection

6. Result
가. chemi-doc을 이용하여 찍은 protein marker와 sample의 결과 사진

7. Discussion
가. 항원-항체 반응 (Antigen-Antibody reaction)
나. Detection의 원리

8. Remark

9. Reference

본문내용

3. Purpose :
가. 항원-항체 반응을 이해하고, 이를 통해 특정 단백질을 찾을 수 있음.

나. 항원-항체 반응 이후, membrane을 ECL에 반응시켜 band를 확인할 수 있음.

4. Materials : TTBS, S1 pipette filler, ATG5 primary antibody(Recombinant Anti-APG5L/ATG5 antibody [EPR1755(2)]), 5% skim milk, 마이크로 피펫, 피펫팁, 15ml tube, mouse-anti-rabbit IgG-HRP(secondary antibody), ECL, 킴테크 와이퍼, 1.5ml tube, 70% 에탄올, 집게, 폐기통

5. Method :
가. Antibody (항원-항체 반응)
1) Blocking이 끝나면 Western blot box에 담겨 있는 5% skim milk를 버림.
2) TTBS로 간단하게 washing함.
3) washing 후 ATG5 primary antibody를 준비함.
4) ATG5 primary antibody는 5% skim milk로 희석함.
(skim milk : antibody = 1,000 : 1)
가) 5% skim milk 10ml를 western blot box에 넣음.
나) primary antibody 10㎕를 western blot box에 넣음.

5) primary antibody는 4℃에서 overnight으로 반응시킴.
6) ATG5 antibody가 포함된 5% skim milk는 재사용을 위해 15ml tube에 옮긴 후 냉장보관함.
7) overnight 후에 TTBS로 washing함.
가) TTBS 10ml를 western blot box에 넣음.
나) 10분간 washing함.
다) 10분 후 washing이 끝나면, TTBS를 버림.
라) 과정 가)~다)를 2회 더 반복하여 시행함.

참고 자료

Merck, “An Introduction to Antibodies: Antibody-Antigen Interaction”,
2020.06, https://www.sigmaaldrich.com/technical-documents/articles/biology/antibody-antigen-interaction.html.
Antibody Center, “TechNote(Western Blot)”, 2020.06,
file:///C:/Users/user/Downloads/Western+Blot-%EC%A0%95%EC%A7%80%EC%9D%80(Antibody+Center).pdf.
angelo.edu, “Luminol:A Glow-in-the-Dark Reaction”, 2020.06, https://www.angelo.edu/faculty/kboudrea/demos/luminol/luminol.htm.
CUSABIO, “The difference between primary antibody and secondary antibody”, 2020.06, https://www.cusabio.com/c-15039.html.