생화학실험, 단백질 정량, 단백질 전기영동, gel staining, western blot 실험보고서

최초 등록일
2014.12.22
최종 저작일
2014.10
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소개글

생화학실험인 단백질 정량, 단백질 전기영동, gel staining, western blot 실험보고서 입니다
평가 결과 만점 받은 실험보고서입니다.
많은 참고 바랍니다.

목차

1. 실험제목
2. 실험목적
3. 실험결과
4. 이론 및 고찰
5. 참고문헌

본문내용

5)실험을 통하여 얻은 결과를 설명하시오.
BSA 표준 단백질의 흡광도 측정 결과 BSA의 양을 1㎍, 2㎍, 3㎍, 4㎍, 5㎍으로 하였을 때 흡광도의 평균값은 0.3322, 0.373, 0.3475, 0.3855, 0.394로 점차 증가하였다. 첨가하는 BSA의 양이 3㎍, 4㎍, 5㎍였을 때에는 1차 흡광도 측정값과 2차 흡광도 측정 값이 유사하게 나온 반면에 BSA의 양이 1㎍와 2㎍이었을 때에는 1차 흡광도 측정값과 2차 흡광도 측정 값이 차이가 크게 나왔다. 이로 인해 BSA 표준 단백질의 흡광도-단백질 농도 그래프를 그렸을 때 그래프의 모양이 예상한 것과 다르게 이상한 커브 형태를 나타내었고 추세선을 기준으로 하였을 때 심하게 벗어난 모습이었다. 신뢰도가 떨어지는 BSA의 양이 1㎍와 2㎍이었을 때의 흡광도 측정값을 제외한 그래프를 그려보면 추세선과 잘 맞아 떨어지며 커브가 없는 정상적인 곡선이지만, 데이터의 범위가 작아지기 때문에 앞의 두 측정값을 포함하여 그래프를 그린 것을 단백질 정량분석 하는데 사용하였다.
단백질의 농도는 BSA 표준 단백질의 흡광도-단백질 농도 그래프의 2차 방정식 수식에 대입하여 계산하였다. 2차 방정식은 y = 185.94x2 - 87.495x + 10.061이고 이때 X는 흡광도, Y는 단백질의 농도를 의미한다.
시료의 흡광도 측정 결과 근원세포(0h)는 1차 측정 때는 0.291, 2차 측정 때에는 0.279이었고 두 값의 차이가 적었으며 평균값은 0.285이었다. 근관세포(96h)는 1차 측정 때는 0.314, 2차 측정 때에는 0.325이었고 두 값의 차이가 적었으며 평균값은 0.3195였다.
근원세포의 흡광도의 평균값이 0.285로 측정되었으므로, 단백질의 농도는 185.94×〖0.285〗^2-87.495×0.285+10.061=0.228(㎍/μl)이었다. 근관세포의 흡광도의 평균값이 0.3195로 측정되었으므로, 단백질의 농도는 185.94×〖0.3195〗^2-87.495×0.3195+10.061=1.087(㎍/μl)이었다.

참고 자료

Wikipedia, “ponceau S”, < http://en.wikipedia.org/wiki/Ponceau_S >
Wikipedia, “Bromophenol blue”, < http://en.wikipedia.org/wiki/Bromophenol_blue>
“Chemiluminescence”, 『생명과학대사전』, 한국생물과학협회.박상대, 분자세포생물학, 아카데미서적, 1998, p.15.
Eric P. Widmaier, Hershel Raff, and Kevin T. Strang, Vander’s Human Physiology, McGrawHill, 2009, p.286~287.
Reece, Urry, Cain, Wasserman, Minorsky, and Jackson, Campbell Biology, Pearson, 2012, p.1103~1112.

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