레포트1_miniprep

소개

"Miniprep 예비/결과레포트"에 대한 내용입니다.

목차

1. Abstract
2. Experiment
3. Result
4. Discussion
5. Reference

본문내용

1. Abstract
이번 실험은 미생물에서 Plasmid DNA를 분리하는 것을 목적으로 한 실험이었다. 여러 가지 Buffer(S1, S2, S3, PW, EB)를 이용하여 미생물의 세포벽과 세포막을 부수고 Plasmid DNA만을 분리하였다. 이러한 과정을 Miniprep이라고 한다. 얻어진 Plasmid DNA를 Agarose gel 전기영동을 하여 크기를 측정 후 기준이 되는 DNA ladder와 비교하였다.

2. Experiment
이번 실험에서 사용된 5가지 Buffer의 조성과 역할
① S1 buffer : Tris buffer, EDTA, (+RNase), Glucose로 구성
- Tris buffer : 세포의 형태를 유지시키는 역할을 하고 완충용액으로 pH를 조절한다.
- EDTA : 세포벽을 유지하는데 필수적인 이온을 제거하여 세포벽을 약화시킨다.
- RNase : RNA를 분해 및 제거하는 역할을 한다. 이 효소는 상온에서 불안정하여 단백질 손상에 의해 활성을 잃을 수 있기 때문에 얼음에서 보관하여야 한다.
- Glucose : 용액과 세포의 삼투압을 조절한다. 세포가 급격히 터질 때 DNA가 부서지지 않도록 보호해준다.
 이러한 작용들이 모여 S1 buffer는 세포벽 파괴의 역할을 하게 된다.

② S2 buffer : SDS, NaOH로 구성
- SDS(Sodium Dodecyl Sulfate) : 음이온 계면활성제의 일종으로 세포막을 분해한다.세포의 다른 단백질을 변형시켜 Plasmid DNA를 얻어내는데 방해되는 물질을 제거한다.
- NaOH : 강염기로 DNA의 수소결합을 끊어 DNA를 변성시키는 역할을 한다.

참고자료

· 2019 생물화학공학이론 및 실험” 실험 노트
· Joanne M.Wiley, 2015, “Prescott의 핵심 미생물학”, p229
· 남상욱, 권혁빈, 2008, “유전공학의 이해”, 라이프 사이언스, p35-37
· 유주현, 변유량, 2007, “응용미생물학실험”, 효일, p210-224
· LaboPass miniprep kit protocol
· DyneBioInc_Plasmid Miniprep kit
· https://bitesizebio.com/13516/how-dna-extraction-rna-miniprep-kits-work/
· google 이미지