9 주 종이캐릭터 조합 (4 마리 캐릭터의 의인화 )9 주 칠교놀이 ( 문자 ) G H C E ㅂ ㅎ9 주 칠교놀이 ( 사물 ) 우주선 전등 집9 주 칠교놀이 ( 사물 ) 촛불 자동차 크리스마스트리9 주 칠교놀이 ( 동물 ) 닭 낙타 춤추는 사람9 주 칠교놀이 ( 동물 ) 여우 강아지 물고기9 주 칠교놀이 ( 숫자 ) 1 0 3 710 주 같은 형태 다른 이미지 – 캐릭터 프린트 1 장 3 개 선택10 주 다른 형태 같은 이미지 – 4 가지 문자 연상11 주 실루엣 표현 ( 검은종이 )12 주 사물의 형태 분석 ( 평면도의 입체 표현 )12 주 시각적 사고의 습관화 – 상상하여 네컷 표현 , 낙서 해석13 주 제품의 다양한 용도 / 논리적 연관 / 비유13 주 단어의 시각표현 / 목록 1-2 의결합 이미지 , 동물 악기14 주 새로운 감각 표현 / 능력강화 발명품14 주 재료의 결합 / 미래 개선 발명품상상발명품 콘센트를 찾아서 in 카페 카페에서 콘센트를 사용할 일이 있게 된다 . 주로 의자 아래에 있고 개수도 많지 않아 여러 사람이 사용하기에 어려움이 있다 . 허리를 숙여 콘센트 구멍을 찾아야하기 때문에 잘못하다가는 책상이 흔들려 음료를 엎을 수도 있게 된다 . 서랍처럼 꺼낼 수 있는 구조로 만들어 꺼냈다가 넣었다가를 할 수 있게 한다 . 내부에 케이블 선으로 연결이 되어있어 길게 뺄 수 잇다 . 또한 콘센트를 꾹 누르면 튀어나오게 되는데 이 때 콘센트 구멍이 여러 개인 입체 콘센트로 바뀌게 되어 여러 사람이 사용하기 쉽게 할 수 있다 .상상발명품 우산 드라이기 비오는 날 젖은 우산을 들고 실내에 들어가면 물이 흐르기 때문에 비닐을 많이 사용한다 . 하지만 이는 환경오염의 문제가 있고 사용이 불편하다는 단점이 있다 . 그래서 통에 회전 모터를 달아 우산을 꽂으면 자동으로 돌아가서 우산을 털어 물을 제거할 수 있다 . 통의 주위에는 수분을 흡수할 수 있는 재질로 해놓아 물기를 흡수한다 . 일회용 비닐을 사용하지 않아 환경 오염을 막을 수 있다 .상상발명품 리필용 아이라이너 여자들이라면 아이라이너를 한번 쯤은 써보았을 것이다 . 생각보다 금방 다 써버리기 때문에 재구매를 자주 하게 된다 . 그런데 겉의 케이스부분은 멀쩡한데 내용물을 다 사용하여 버리게 되는 문제점이 있다 . 재사용이 가능한 부분은 다시 사용하면서 , 내용물인 심부분만 리필용으로 따로 싸게 팔아 환경도 보존하고 소비자의 가격부담도 절감할 수 있다 .상상발명품 땀 제거 지문 센서 손에 땀이 많은 사람들이나 젖은 손으로 자주 핸드폰을 만져야 하는 사람들의 경우 지문 인식의 오류를 많이 겪게 된다 . 그래서 빠르게 수분을 제거하며 지문을 인식할 수 있는 방법을 찾아보았다 . 최근에 인기를 끌고 있는 규조토 발매트의 경우 순간적인 흡수력이 매우 뛰어나다 . 이를 핸드폰 지문 센서에 융합을 시켜보았다 . 규조토 재질의 커버로 지문센서를 덮고 그것을 위로 올리면서 땀이나 수분을 제거하여 지문을 잘 인식할 수 있다 .상상발명품 아코디언 물병 등산같은 운동을 할 때 , 물은 필수이지만 짐의 부피가 크게 되면 힘이 들게 된다 . 일상생활에서도 물을 마시기 위해 학교에 갈 때에 물통을 가지고 간다 . 왔다 갔다 하는 동안에는 물을 잘 마시지 않기도 하고 , 물을 가방에 넣어가지고 다니면 무겁고 물이 샐 위험이 있다 . 물 을 마시고 싶을 때에만 물통을 키우고 , 아닐 때에는 작에 접어 휴대성을 키운 물병이다 . 큰 비율로 물통의 크기를 줄일 수 있다 .상상발명품 머리카락 빗자루와 쓰레기통 머리를 감은 후 드라이를 하게 되면 머리카락이 많이 빠져서 바닥이 더러워진다 . 이 경우 보통 간편하게 빗자루로 쓸어서 쓰레기통에 버리는 경우가 많이 있다 . 하지만 머리카락이 빗자루에 엉켜 잘 떨어지지 않아 손을 이용해 떼어야 한다 . 머리를 빗는 빗의 원리를 쓰레기통과 융합하여 보았다 . 쓰레기통 한 쪽에 빗과 같이 사이사이 구멍이 있는 구조를 설치 해놓고 그 부분으로 빗을 한번 통과시켜 주면 날에 의해 머리카락이 빠지게 된다 . 손을 사용하지 않아도 되서 위생적이다 .상상발명품 자동으로 지워지는 펜 연필은 마찰을 이용하여 지우개로 지울 수 있다 . 하지만 자동으로는 지워지지 않는다 . 공부할 때 밑줄 긋는 용으로 많이 사용하는 형광펜의 경우 간편하게 지우기 힘들다 . 이때 형광펜은 형광물질과 용매로 구성되어 있게 된다 . 자연적으로 시간이 지나면 날아가는 기화의 원리를 이용하여 기화될 수 있는 물질로 펜을 제작한다 . 이 펜의 경우 시간이 지나면 자연스럽게 사라지게 되어 새책이 되므로 다시 문제를 풀거나 다른 사람에게 물려주거나 중고로 팔기에 좋다 .{nameOfApplication=Show}
결과레포트실 험 제 목 :Plasmid DNA isolation from bacteria cell : Miniprep조 :학 번 :이 름 :1. Abstract이번 실험은 미생물에서 Plasmid DNA를 분리하는 것을 목적으로 한 실험이었다. 여러 가지 Buffer(S1, S2, S3, PW, EB)를 이용하여 미생물의 세포벽과 세포막을 부수고 Plasmid DNA만을 분리하였다. 이러한 과정을 Miniprep이라고 한다. 얻어진 Plasmid DNA를 Agarose gel 전기영동을 하여 크기를 측정 후 기준이 되는 DNA ladder와 비교하였다.2. Experiment◈ 이번 실험에서 사용된 5가지 Buffer의 조성과 역할① S1 buffer : Tris buffer, EDTA, (+RNase), Glucose로 구성- Tris buffer : 세포의 형태를 유지시키는 역할을 하고 완충용액으로 pH를 조절한다.- EDTA : 세포벽을 유지하는데 필수적인Ca ^{2+}이온을 제거하여 세포벽을 약화시킨다.- RNase : RNA를 분해 및 제거하는 역할을 한다. 이 효소는 상온에서 불안정하여 단백질 손상에 의해 활성을 잃을 수 있기 때문에 얼음에서 보관하여야 한다.- Glucose : 용액과 세포의 삼투압을 조절한다. 세포가 급격히 터질 때 DNA가 부서지지 않도록 보호해준다.? 이러한 작용들이 모여 S1 buffer는 세포벽 파괴의 역할을 하게 된다.② S2 buffer : SDS, NaOH로 구성- SDS(Sodium Dodecyl Sulfate) : 음이온 계면활성제의 일종으로 세포막을 분해한다.세포의 다른 단백질을 변형시켜 Plasmid DNA를 얻어내는데 방해되는 물질을 제거한다.- NaOH : 강염기로 DNA의 수소결합을 끊어 DNA를 변성시키는 역할을 한다.? 이러한 작용들이 모여 S2 buffer는 세포막 파괴의 역할을 하고 pH를 높여 Chromosomal DNA(genomic DNA)를 변성시키는 역할을 한다.③ S3 buffer : G는 중화를 시켜 chromosomal DNA를 응집시킨다.④ PW buffer : Tris buffer, Potassium acetate, (+Ethanol)로 구성- Tris buffer : pH를 유지하는 역할을 한다.- Potassium acetate : SDS를 제거한다.- Ethanol : 단백질과 염을 제거하고 Plasmid DNA를 침전시킨다.? PW buffer는 Plasmid DNA 이외의 이물질을 제거하기 위한 washing 역할을 한다.⑤ EB buffer : Tris buffer로 구성- Tris buffer : elution(용리) buffer로 크기가 작은 plasmid DNA만 분리시킨다.? spin column의 silica에 붙어있는 supercoiled Plasmid DNA를 녹아내려가게 하여 추출될 수 있도록 한다.◈ 실험 방법① 미리 배양한 세포 1.0ml를 1.5ml micro tube에 넣었다.② 원심분리기(Centrifuge)를 이용하여 15000rpm으로 10분간 원심분리한 뒤, 상등액을 micropipette를 이용하여 버려주었다. 원심분리를 할 때 중심축을 기준으로 무게 대칭을 맞춰주어 떨림 없이 작동되게 하였다.? 상등액은 DNA가 없는 물질이고, 아래에 있는 알갱이(Figure. 2)는 Plasmid DNA가 존재하는 미생물 세포이다.③ 세포가 들어있는 micro tube에 얼음 속에 보관되어 있던 S1 buffer를 250mu l 넣고 pipetting을 해주었다.? S1 buffer에 의해 세포벽을 부수어 RNA를 제거한다.④ S2 buffer를 250mu l 넣고 4회 inverting을 하였다. inverting이란 부드럽게 좌우로 흔들어 섞어주는 것이다.? 5분 이상 반응할 경우 Chromosomal DNA가 너무 잘게 쪼개지기 때문에 걸러지지 못하여 순수한 Plasmid DNA를 얻을 수 없다.? S2 buffer에 의해 인지질로 구성된 세포막이 제거되며 pH가 높아져서 단백질과 DNA가 변성된다.⑤umn으로 걸러졌고 Collection tube에 찌꺼기가 있다.⑧ 다시 spin column을 꽂은 후에 PW buffer를 750mu l 넣고 15000rpm으로 1분간 원심분리 하였다.⑨ spin column을 새로운 1.5ml micro tube에 꽂은 후 EB buffer를 50mu l 넣었다.? EB buffer에 의하여 Plasmid DNA가 분리된다.⑩ 상온에서 약 1분 동안 놔둔 후 15000rpm으로 1분간 원심분리 하고 1.5ml micro tube에 추출된 Plasmid DNA는 ?20℃에서 보관한다.- 실제로 이 뒤의 실험과정은 실험실에서 진행하지는 않았다.① 전기영동기기에 Agarose gel을 넣고 TAE buffer를 채운다.② Agarose gel의 첫 번째 홈에 DNA ladder를 loading한다.- 이때 DNA ladder는 샘플의 크기를 알기 위한 기준으로 사용되는 시약이다.③ Loading star를 새로운 microtube에 넣고 plasmid DNA 추출 용액과 섞은 뒤 두 번째 홈에 loading한다.- Loading star는 DNA와 결합해서 agarose gel 상에서 DNA의 위치를 파악하게 해주는 염색약이다.④ 100V 전압에서 1시간동안 전기영동을 한다.⑤ Agarose gel을 꺼내 UV transilluminator 위에 놓고 자외선을 쬐어 Plasmid DNA의 크기를 확인한다.Figure 1. Centrifuge Figure 2. 원심분리 후 상등액&미생물 세포Figure 3. 응집된 chromosomal DNA Figure 4. Spin colum & collection tubeFigure 3.의 경우 S1, S2, S3 buffer까지 모두 넣고 원심분리를 10분 한 후 상등액을 Spin column에 부어준 후 모습이다. 이것은 Alkaline lysis에 의해 pH를 변화시켜Plamid DNA와 chromosomal DNA를 분리시킨다. 이 과정에서 chromosomal DNA는엉겨 붙어 을 확인하였다. 실험결과로 Plasmid DNA 크기가 8kbp가 나오지 않은 이유는 Discussion에서 작성하였다.Figure 5. 전기영동 결과이번 실험에서는 Alkaline lysis법을 이용하여 miniprep을 진행한 것이다. 실험 시 각 단계별 세포의 상태와 모양을 알아보았다. 크게 Figure 6.과 같은 과정으로 진행이 되었다.Figure 6. 실험 진행 과정(Alkaline lysis)과정1) S1, S2 buffer를 넣은 후의 상태로 세포벽과 세포막을 파괴하고 NaOH에 의해 pH가 높아져 chromosomal DNA가 변성되어 단일가닥으로 바뀌었다.과정2) S3 buffer를 넣어 중화를 시켜 chromosomal DNA를 응집시킨다.과정3) 원심분리를 하여 Plasmid DNA를 분리해낸다.Alkaline lysis 이후의 과정은 Figure 7.의 실리카 흡착법 부분에 나타나있다. spin column 안쪽에는 silica 물질이 있어 DNA를 붙잡아두는 역할을 한다.과정4) spin column과 collection tube에 옮기고 PW buffer를 넣어 DNA이외의 물질들을 씻어주어 Plasmid DNA를 얻을 수 있다.과정5) EB buffer를 넣어 elution을 하여 DNA를 씻어내어 순수한 Plasmid DNA를 얻을 수 있다.Figure 7. 실리카 흡착법4. Discussion① S1 buffer를 냉장 보관해야 하는 이유원래의 S1 buffer는 Tris buffer, EDTA, Glucose로 구성되어 있다. 실험을 처음 시작하기 바로 전에 RNase를 넣어주어야 하며 약 4℃에서 보관하여야 한다. 그 이유는 RNase를 안정적으로 오래 보관하기 위해서이다. RNase 효소는 상온에서 안정하지 못하여 단백질 손상에 의해 효소의 활성을 잃어버릴 수 있다. 6개월까지는 활성이 유지되지만 그 이상 보관을 할 경우 냉장보관을 해주어야 하는 것이다.② S2 buffer 반응시간 5분을 넘으면 안 되는 이유세균에서는 P단계인 S3 buffer를 넣게 되면 다시 중성으로 바뀌면서 Chromosomal DNA만 엉겨 붙어 가라앉게 되고 원심분리를 하면 Plasmid DNA를 분리 할 수 있는 것이다.? Plasmid DNA의 모양과 특징Plasmid는 대부분 응축되고 꼬인 supercoiled form으로 존재한다. 하지만 정제하는 과정 중 변형이 가해지면 3가지 형태의 모양이 가능하다. 일반적인 supercoiled form, 이중 가닥 중 한 가닥이 잘린 nick form, 두가닥 모두 잘려나간 linear form (일반적인 이중가닥 DNA인 chromosomal DNA)이 존재한다. supercoiled form의 Plasmid가 물리, 화학적 변화에 노출되면 nick form 또는 linear form으로 변형될 수 있다.Agarose gel을 통과할 때 supercoiled form은 응축된 형태이므로 가장 빠르게 진행되고, nick form은 한 가닥만 잘려서 가장 저항을 많이 받아 느리게 진행된다. 따라서 전기영동 시 진행속도는 supercoiled form>linear form>nick form 순으로 빠르다.실험 과정에서 넣는 S2 buffer에는 NaOH의 강염기성 물질이 있어 오래 노출시키게 되면 아무리 chromosomal DNA에 비해 강하다고 해도 결합이 끊어져 변형될 수 있다. 그렇기 때문에 S2 buffer를 넣고 5분 이상 반응시키면 안 된다.③ Guanidine hydrochloride, Ethanol 원리(Spin column과 연관) vs EB bufferSpin column은 glass-fiber의 membrane으로 이루어져있다. DNA는 phosphate group의 (-)전하로 인해 높은 염의 농도 하에서 column의 membrane에 형성된 (+)전하와 결합을 한다.- Guanidine hydrochloride은 높은 농도의 염 역할을 하여 Spin column에 Plasmid DNA가 잘 붙도록 해준다. 또한 소수성 잔기의 용해석)
결과레포트실 험 제 목 :Transformation조 :학 번 :이 름 :1. Abstract이번 실험은 재조합된 DNA(eGFP)를 competent cell에 넣은 후, 용액을 Ampicillin이 포함되어 있는 LB 배지에 고르게 도말한다. 생성된 colony를 대조군과 비교하여 형질전환(transformation)에 대하여 고찰해보는 것이다.2. Experiment? 시약 및 장치- BL21(E.coli competent cell) : DNA를 삽입할 수 있도록 처리한 세포이다. 단백질 발현을 위해 사용한다.- LB 배지 : 박테리아 성장에 주로 사용되며 영양소를 공급해주는 Yeast extract(효모추출물), 삼투압을 조절하여 세포가 터지지 않게 해주는 NaCl, 질소공급원으로 사용되는 Tryptone으로 구성되어있다.- Recombinant DNA, Agarose(액체 배지를 고체로 굳혀주는 역할), 1.5ml microtube, Incubator(일정한 온도 유지), Micropipette, autoclave(고온, 고압의 증기 살균기)- Ampicillin(1000X) :beta -lactam계 항생제로 세균의 세포벽 합성을 방해한다. 온도에 민감하기 때문에 60℃ 이하에서 사용해야 한다.? 실험 방법LB 고체배지 조성100ml 기준Tryptone1gYeast Extract0.5gNaC`l1gAgarose1.5gTable 1. 고체 배지 조성① Table 1의 조성으로 LB고체를 만든 후 Autoclave로 멸균한다.? Autoclave 사용 시 끓어 넘칠 수 있기 때문에 증류수를 반 정도 채워주고 사용하며 고온, 고압이므로 주의하여 사용한다. 멸균 후 온도와 압력이 충분히 떨어진 후에 뚜껑을 열어야 한다.② 60℃이하가 되었을 때, Ampicillin(1000X)을 넣고 Petridish에 각각 20ml 씩 넣고 식힌다.(2개)? 이 단계까지는 조교님이 만들어 오셨다.③ 재조합 된 DNA를 Table 2와 같은 비율로 1.5ml MicrotuCl _{2}를 처리하게 되는데Ca ^{2+}이온이 (-)를 띄는 인산염(phosphate)와 complex를 이루게 되는데, 낮은 온도에서 세포막을 응고시키면 charged phosphate의 분포를 안정화시켜Ca ^{2+}에 의해 효과적으로 둘러싸일 수 있다. 이때 heat shock를 가해주면 세포막 안팎의 열적 불균형을 일으켜 DNA가 세포 내부로 빨려 들어가는 형질전환이 일어나게 된다.⑤ 앞에서 반응시킨 용액을 고체배지에 옮겨 Spreader로 고르게 도말하고, 마찬가지로 대조군에 해당되는 고체배지에 DNA를 넣지 않은 BL21을 도말한다.? Spreader로 도말을 할 때 알코올로 손을 소독을 한 후 clean bench에서 진행을 하였다. spreader로 도말을 할 때 배지가 찢어지지 않도록 주의하였다.? 고체배지를 사용하는 이유는 고체배지에서 군락이 형성되어야 다른 종류의 미생물과 섞이지 않아 분리하기 쉽기 때문이다.? clean bench : 세포 배양과 같은 무균조작이 필요할 경우 무균 실험대로 사용되는 공간으로 실험대 공간에 분진, 포자 등이 들어 있지 않은 깨끗한 공기로 채우는 장치이다. 작업 중 오염된 공기가 들어오는 것을 막아준다.⑥ 도말이 끝난 배지는 Parafilm으로 Petridish를 감싸 Incubator에서 배양한다.(37℃에서 14-18시간)? 세균 배양 시 다른 세균이 섞이지 않도록 주의하고, 오염을 막기 위해서 Petridish를 뒤집어서 보관한다. 그 이유는 플레이트 내부의 수증기가 응결되어 물방울이 떨어지면 콜로니 형성을 방해 할 수 있으므로 고체 배지로 떨어지는 수분을 막는다. 또한 미생물이 증식할 때 중력에 의하여 골고루 분포시키기 위함이다.⑦ 각각의 고체배지를 비교한다.Figure 1. 제조된 용액 Figure 2. Clean bench에서 배지에 용액 주입Figure 3. Spreader로 도말 Figure 4. 루프를 이용한 추가 실험루프를 이용하여 도말하는 것은 주로 콜로니가 생성되었을 때 사용하는 것이 경우 DNA를 넣어 형질전환 한 세균들이므로 Ampicillin 저항성 유전자가 있기 때문에 콜로니가 형성된 것을 볼 수 있다. 상대적으로 1조와 3조는 콜로니가 많이 생성되었고, 2조와 6조는 콜로니가 적당히 생성되었다. 하지만 4조의 경우 거의 생성되지 않았는데 도말을 제대로 하지 않아서 그런 것 같다. 또한 5조의 경우 LB배지가 찢어져서 콜로니가 고르게 생성되지 못한 것 같다.? Competent cellCompetent cell은 형질 전환을 위하여 정상적인 세균에 화학적 처리를 하여 DNA가 잘 들어갈 수 있도록 만든 세포이다. 일반적으로 세포와 DNA는 모두 (-)전하를 띄기 때문에 서로 척력을 형성하여 DNA가 세포 내부로 들어가기 어렵게 된다. 이때CaCl _{2}를 처리하게 되면Ca ^{2+}이온에 의해 세포막에 존재하는 지질의 (-)전하의 인산염과 Complex를 이루게 되어 세포막과 DNA 사이의 반발력이 중화되어 DNA가 세포막 주위에 쉽게 놓이게 된다. 또한 2가 양이온들은 대장균 세포막 고유의 전기적 성질을 변화시켜서 막 구조를 불안정하게 하고 외부 DNA를 세포 내부로 유입시키는 것을 용이하게 하는 역할도 한다.Competent cell을 만들고 사용할 경우 낮은 온도를 유지해야 하는데, 그 이유는 낮은 온도에서는 세포막을 구성하고 있는 인지질의 유동성이 감소하여 세포막의 전하 배치가 안정화되고 처리한 2가 양이온이 고르게 세포막 주위에 분포하게 된다.? Transformation기존의 세포에 외부 유전자를 도입시키는 것으로 세포가 원래와 다른 유전적 형질을 갖는 것을 말한다. 이를 형질전환이라고 한다. 다시 말해 원래의 세포가 외부의 DNA를 흡수하고 결합하여 기존에 갖고 있던 유전정보와 새로운 유전정보를 섞는 것을 말한다. DNA는 강한 (-)전하를 띄고 있는 고분자이기 때문에 세포막을 그대로 통과하지 못한다. 따라서 다음과 같은 Heat shock, Electroporation을 이용하여 형질전환을 시켜준다.Figure 7.의 도입 여부를 확인하는 지표를 selection marker라고 한다. 이번 실험에서는 Ampicillin이 selection marker로 사용되었다. 재조합된 DNA에는 Ampicillin 저항성 유전자(amp ^{R})가 존재하기 때문에, Ampicillin이 들어있는 배지에서 배양을 할 경우 대조군과 다르게 Colony를 형성할 수 있다. 반면 재조합되지 않은 DNA에는 Ampicillin 저항성 유전자가 없기 때문에 Colony를 형성할 수 없고 Ampicillin의 독성으로 인하여 살균된다. 이러한 성질을 이용하여 형질전환 된 세균만 얻을 수 있게 되어 selection marker로 사용된다. Figure 11의 AP부분이 Ampicillin 저항성 유전자를 의미하며 Selection marker이다. 우리가 사용한 플라스미드에 AP가 존재하므로 LB배지에 Ampicillin을 넣어 배양을 해서 형질전환이 잘 되었는지 확인할 수 있다.Figure 10. Selection marker인 AmpicillinFigure 11. pET-22b(+) Vector의 Ap4. Discussion1) 외부의 DNA를 세포 속에 전달하는 방법① Transformation(형질변환)형질변환은 주위로부터 DNA의 이동을 말한다. 원래의 세포가 가지고 있던 것과 다른 종류의 유전자가 있는 DNA 사슬 조각 또는 Plasmid가 직접 세포 사이에 침투되어 원래 세포에 존재하던 DNA와 결합하여 세포의 유전형질이 변화되는 현상을 말한다. 세균(박테리아)에서 흔히 관찰될 수 있으며 인위적인 유전자 조작을 통해서도 이루어질 수 있다.② Transduction(형질도입)형질도입은 파지에 의한 DNA의 이동을 말한다. 형질전환과 유사하지만 박테리오파지와 같은 바이러스를 매개로 하여 형질전환 된 박테리아의 새로운 형질이 다른 박테리아로 옮겨가는 경우에는 형질도입이라고 한다. 즉 어떤 세균의 DNA가 바이러스를 통해서 다른 세균으로 옮겨가는 현상을 말한다. 박테리오파지(세균을 감염으므로 F-라고 한다. F+세균(그람음성균)은 성선모라는 것을 만들어서 상대 세포와 접촉하도록 한다. F-세균은 그람양성균인데 성선모는 만들지 않지만 세포가 잘 붙을 수 있게 돕는 물질을 만든다. 이렇게 붙은 뒤에는 이중나선 DNA로 된 F factor의 한 가닥이 F-세포로 전달된다. 이에 대한 상보적인 가닥은 각각의 세포에서 만들어진다. 이렇게 되면 두 세포 모두 F factor를 갖는 F+세포가 된다. 박테리아와 박테리아 사이의 유전물질 이동 및 재조합을 하는 방법으로 자연적으로 가장 많이 일어나는 방법이다.④ Transfection(형질주입)형질전환(transformation)과 감염(infection)의 합성어로 진핵세포에 DNA를 주입하는 것을 말한다. 원핵세포에 플라스미드로 핵산을 주입하는 것은 형질전환, 바이러스를 이용하여 원핵세포에 핵산을 주입하는 것은 형질도입, 세균이 성선모로 유전물질을 주고받는 경우 접합이라고 부른다.2) Ampicillin을 60℃ 이하에서 넣는 이유Selection marker 역할을 하는 Ampicillin은 온도에 민감한 항생제이다. 따라서 온도가 60℃ 이상일 때는 활성을 잃게 될 수 있다. 그렇게 되면 selection marker의 역할을 하지 못하므로 60℃ 이하의 온도에서 Ampicillin을 넣어주어야 한다. 배지가 많이 굳지도 않고 Ampicillin의 활성을 떨어뜨리지 않을 수 있는 적정온도에서 실험을 진행하여야 한다.Figure 12의 화살표 부위가 Ampicillin 저항성 박테리아가 가지고 있는 부분을 말한다.beta -lactamase는 Ampicillin과 결합하여 Ampicillin을 분해하므로 이것을 가지고 있으면 Ampicillin에 저항성을 갖게 된다.Figure 12. Ampicillin의 구조와beta -lactam 고리3) E.coli competent cell : BL21 vs DH5alpha E.coli BL21과 DH5alpha 모두 E.coli RNA polymerase(중
상상공학과 표현 과제, 상상발명품
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