[생물화학공학실험]Restriction of DNA

소개

"[생물화학공학실험]Restriction of DNA"에 대한 내용입니다.

목차

1. Abstract
2. Experiment
3. Results & Discussion
4. Conclusion
5. Reference

본문내용

1. Abstract
특정 단백질을 대량 생산하기 위해 원하고자 하는 DNA를 plasmid DNA에 삽입하는데, 삽입 전에 이루어지는 실험이 Restriction 실험이다. Restirction은 특정 제한효소를 이용하여 제한효소가 특정 염기서열을 인식하여 DNA를 자르는 과정으로, 이번 실험에서는 ‘Nde I, EcoR I, Xho I’ 세 가지 제한효소가 이용되었다.
실험은 DDW, DNA, 10X H buffer, enzyme을 용액으로 만든 후, 1시간 동안 반응을 시키고 전기영동을 이용하여 실험결과를 확인하는 과정을 거치며, 실험 결과는 Fig 4에 나타내었다.
실험 결과는 세 밴드 이외 밴드를 형성하였고, 희미한 잔상이 나타났고, 이러한 실험 결과는 ‘(1) Star activity, (2) 제한효소의 오작동, (3) 실험에서 발생한 불순물’ 등의 오차로 인해 발생 하였다고 보았다.

2. Experiment
1) 기구 및 시약
(1) Plasmid
(2) 10X H buffer
(3) Restriction Enzyme (Nde I, EcoR I, Xho I,)
이번 실험에 사용한 제한효소인 Nde I, EcoR I, Xho I는 인식부위 내 또는 그 근방의 특정부위를 절단하는 특징을 갖는 Type 2 제한효소으로 sticky end를 형성한다. 각 효소별로 자르는 DNA 염기서열은 다음 Fig 1과 같다. Sticky end와 blunt end는 Fig 2와 같은 형태를 갖고, Sticky end의 경우 염기 간 상보적 결합으로 blunt end보다 결합이 용이하다.

<중 략>

4. Conclusion
Restriction of DNA 실험은 간단히 Restriction 용액 제조, 반응, 전기영동 세 가지로 나눠진다.
Restriction 용액의 경우 Table 1의 성분과 같이 만들어지고, DDW, DNA, 10X H buffer, enzyme (Nde I, EcoR I, Xho I) 순으로 넣어준다. 반응은 제조된 용액을 37℃에서 1시간동안 시켜주며, 반응한 용액을 전기영동 돌리고 결과를 확인한다.

참고자료

· Voet 외 3인. “Fundamentals of Biochemistry”. 자유아카데미(2007). P44-46
· Burton E. Tropp. “핵심 분자생물학”. 월드사이언스(2016). P119-126
· pET-22b(+) vector Protocol Book, 유전자 서열 protocol
· 실험노트