[분자생물학실험]형질전환 유전 물질의 추출 및 확인

소개

형질전환, 유전 물질의 추출 및 확인
Transformation, Plasmid Preparation, Enzyme Digestion 실험에 관한 자료입니다.

목차

1. 실험 목적

2. 실험 이론 및 원리
1) Transformation과 Transfection의 차이점
2) pLITMUS28
3) 형질전환 (transformation) 방법
4) GFP (Green Fluorescent Protein)
5) DNA의 form과 이동속도
6) 260㎚/280㎚ ratio
7) 아가로스 겔 전기영동
8) 움직임의 속도에 영향을 주는 요인들

3. 실험 방법
1) 실험 과정

4. 실험 결과
1) 결과 분석

5. 토의 사항
1) 실험 고찰

본문내용

1. 실험 목적

가. 박테리아의 유전형질을 plasmid를 이용한 유전자도입 방법으로 전환시키고 형질전환된 박테리아를 선택하는 과정 등을 이해한다.
나. 유전물질을 추출해내는 방법에 대하여 알아본다.
다. 유전물질을 확인하고 이에 대해 알아본다.

2. 실험 이론 및 원리

가. Transformation과 Transfection의 차이점
Transformation은 DNA를 bacterial cell에 넣는 과정으로 이를 통해 host cell의 형질전환을 일으키는 것을 뜻한다. 여기서 bacterial cell이란 E.coli와 같은 원핵세포를 말한다. 주입한 DNA가 들어있는 plasmid를 열이나 전기를 통해 cell안으로 주입시킨다. 반면, Transfection은 DNA를 진핵세포에 직접 넣어주는 것으로 형질 주입이라 한다. 형질전환과 감염이 합성된 말로 plasmid가 이용되지 않는 형질전환, 즉 phage를 이용한 것을 말한다.

나. pLITMUS28
소형사이즈의 플라스미드이다. (<3kb), LITMUS sequencing primer뿐만 아니라 pUC / M13 시퀀싱 프라이머와도 호환 가능하다. 다용도 클로닝 / 시험 관내 전사 파지 메이트 벡터이다. Litmus 28i를 정제하기 위해 표준 정제 과정에 의해 E.coli ER2738으로부터 분리된다. Litmus 28i는 NEB의 HiScribe RNAi Transcription Kit를 사용하여 이중 가닥 RNA의 효율적인 전사를 위해 설계되었다.

다. 형질전환 (transformation) 방법
1) Heat shock : Heat shock을 가하면 E.coli의 membrane potential이 감소하고 감소한 membrane potential이 DNA의 cell내로의 유입을 촉진하게 된다. 과도한 열을 가하게 되면 cell이 파괴되고, 너무 낮은 열을 가하면 DNA의 유입이 줄어들기 때문에 적당한 열을 가해야 한다.

참고자료

· 없음