Genomic DNA 추출 및 PCR

목차

1. Experiment
2. Experiment Method
3. Attention
4. Result
5. Discussion
6. Reference

본문내용

1. Experiment
실험에 앞서 50X TAE Buffer와 Agarose powdar, PCR solution: SapphireAmp Fast Pcr Master Mix(+primer)를 준비하고 GeneJET Genomic DNA purification kit를 준비한다. DNA ladder와 6X Sample loading buffer, 면봉(or 대장균)이 역시 필요하다. 실험에 직접 제조해서 쓰는 용액으로 1X TAE Buffer 1L와 0.5~2% Agarose gel, 50% 에탄올을 제조한다.

2. Experiment Method
첫 번째로 Agarose gel 제조를 한다. 1X TAE 완충용액에 Agarose가 5~15%가 되게 powder을 유리병에 넣어준다. 이때 최소부피는 100ml 기준으로 한다. 그 다음 전자레인지를 이용하여 1분 간격으로 powder가 완전히 용해 될 때까지 돌려준다. 이때 주의 사항으로는 유리병 뚜껑을 열고 꼭 1분 간격으로 거품이 안 생기게 해서 돌려야 한다. power가 완전 용해되고 대략 10~20분 후 손으로 만졌을 때 약간 뜨겁다는 느꼈을 때 RedSage(20000X)을 넣어준다.

그 후 gel plate 부은 담은 comb을 꽂아서 굳을 때까지 기다린다. 굳은 후 sample들을 6X sample loading buffer와 잘 섞은 다음 홈에 넣어준다. gel이 잠길 정도로 1X TAE Buffer을 전기영동 장치에 채우고, 전기영동을 실행한다.

Agarose gel은 전기영동에 쓰이는 것으로 DNA가 이동하는 매질의 역할을 한다. DNA를 고정하는 능력이 우수하며 DNA를 분자량에 따라 분리해내기가 용이하다.

두 번째로, Genomic DNA추출을 하기 위해 면봉을 이용하여 구강에서 남녀 DNA를 채취한다. 조심스럽게 솜 부분만 microtube에 넣어준다. sample이 들어간 microtube에 solution A 200uL을 넣어주고 vortexing을 해준다.

참고자료

· T.Y. Wang, L. Wang, J.H. Zhang and W.H. Dong, “A simplified universal genomic DNA extraction protocol suitable for PCR” (2011).
· Ahmed I, Islam M, Arshad W, Mannan A, et al. (2009). High-quality plant DNA extraction for PCR: an easy approach. J. Appl. Genet. 50: 105-107.