[충남대] 세포생리학실험 - HEK293T cell 계대배양과 genomic DNA 및 total RNA 추출

소개글

충남대 세포생리학실험 보고서 입니다! (A+)

목차

I. 서론
II. 재료 및 방법
III. 결과
IV. 논의
V. 참고문헌

본문내용

HEK293(Human embryonic kidney 293) 세포는 아데노바이러스 type 5 DNA의 절편에 노출시켜 형질전환된 HEK 세포이다[1]. HEK293T, HEK293S, HEK293SG 등 다양한 유도체가 확립되었다[1]. 그 중 HEK293T 세포는 SV40(the simian virus 40) T 항원을 발현하는 HEK293 세포에서 유래하여, SV40 복제 기점을 포함하는 플라스미드의 복제를 통해 높은 단백질 발현을 유도한다[1].
다세포생물체의 세포를 연구하는 중요한 방법 중의 하나는 생물체에서 분리된 세포를 실험실에서 배양해 실험을 수행하는 것이다[2]. 세포 배양법을 이용함으로써, DNA 복제 기작, 유전자 발현, 단백질 합성과 처리, 세포 분열 등 포유동물에 대한 세포생물학 연구가 가능해졌다[2]. 또한 동물 세포 배양으로 동물체에서 일어나는 세포 성장과 분화를 조절하는 신호전달 기작에 대한 연구가 가능해졌다[2]. 과학이 더욱 발달되면서 세포 하나의 수준에서 모든 생명현상을 찾으려는 노력이 전개되었고 이는 오늘날 분자생물학이라는 영역을 개발케 하였다[3].
동물 조직으로부터 세포를 분리해서 만든 세포배양을 일차 배양(primary culture)이라고 한다[2]. 일반적으로 일차 배양에서 세포는 배양접시 바닥을 완전히 덮을 때까지 분열과 성장을 계속한다[2]. 그 후 세포 일부를 떼어내서 새 배양접시에 옮기면 낮은 밀도로 배양을 다시 계속할 수 있다[2]. 이 과정을 여러 번 반복할 수는 있지만 대부분의 정상 세포는 한계를 가지고 있다[2]. 이와는 달리, 배아줄기세포 또는 종양에서 분리한 세포는 세포 배양에서 무한정 증식할 수 있는데, 이를 불멸 세포주(immortal cell line)라고 부른다[2]. 이러한 세포주는 연속적이며, 균질한 세포 집단을 제공할 수 있으므로, 실험적 조작, 클론화, 증식 등의 연구에서 매우 유용하게 사용된다[2].
세포가 배양용기에서 증식하여 포화상태가 되면 일부 세포들은 떨어져 나가거나 하나씩 분산되어 결국 죽게 된다[4]. 더욱이 떨어져 나간 세포들은 세포 위에 부착되어 세포의 배양액간의 접촉면적을 감소시킬뿐만 아니라 죽은 세포들에서 분비되는 독성에 의하여 영향을 받게 된다[4]. 따라서 세포계대를 하여 세포들을 알맞게 분산시킴으로써 지속적인 배양이 가능할 수 있게 된다[4].

참고 자료

Katsuya Iuchi et al. 2020. Different morphologies of human embryonic kidney 293T cells in various types of culture dishes, Cytotechnology 72, p.132
문자영 외16인. 2021. 세포학 분자적 접근, 제8판, 월드사이언스, pp.22~25
박승택. 1997. 조직세포배양, 계축문화사, p.179
박승택. 2002. 세포배양의 이해, 정문각, p.99, pp.101~103, p.108
김태전 외2인. 2004. 세포배양학 개론, 고려의학, p.208, p.210
남상욱 외2인. 2020. 유전공학의 이해, 제3판, 라이프사이언스, pp.40~42, p.44, p.46
대한화학회. 2010. 표준 일반화학실험, 제7판, 천문각, p.122, p.130