Genomic DNA 추출 및 PCR 예비레포트

목차

1. 실험목적

2. 실험이론
1) 전기영동
2) Agarose gel
3) Genomic DNA
4) Polymerase Chain Reaction(PCR; 중합효소연쇄반응)

3. 실험기구 및 시약

4. 실험방법

본문내용

실험목적

Purification KIT를 이용하여 Genomic DNA(사람 혹은 대장균)을 추출한 뒤 특정 유전자를 PCR을 퉁해 증폭하고, 아가로오스 겔 전기영동법을 이용하여 검출함.

실험이론

전기영동

전기영동은 하전된 입자가 전기장에서 반대 전하의 전극 쪽으로 이동한다는 것에 기초한다. 거대분자는 전하, 모양, 크기 등에 따라 이동성이 다르다. 종이와 용액을 비롯하여 여러 가지 지지매체가 전기영동에 사용되었으나, 가장 흔히 쓰이는 지지체는 칼럼크로마토그래피에 사용되는 것과 유사한 아가로오스나 아크릴아마이드의 중합체이다. 지지매체에 만들어 놓은 구멍[웰(well)]에 시료를 넣는다. 분리되는 정도를 원하는 대로 되게 하려면 적당히 전압을 조절하여 매체를 따라 전류를 건다. 단백질이 젤 상에서 분리되면 젤을 염색하여 단백질의 위치가 보이게 한다.

Agarose gel

Agarose Gel Electrophoresis(아가로오스 겔 전기영동)법은 전기영동법 중의 하나로 전번 실험에 사용하였던 Polyacrylamide와 다르게 주로 큰 분자량의 DNA분리 시 사용하는 방법이다. 사용이 간편하고 다루기 쉽다는 장점을 가지고 있으나 해상도가 떨어진다는 단점을 가지고 있는 Gel로서 그물망 구조를 이루어서 DNA를 운반하기 쉽게 한다. 역시 Polyacrylamide와 같이 Gel의 농도가 DNA분리 범위에 큰 영향을 미치게 된다. Gel의 농도가 크면 클수록 DNA의 움직임은 제한을 받게 되고 따라서 아주 작은 크기의 DNA를 분리하는데 효율을 나타내게 되고 Gel의 농도가 작으면 작을수록 DNA는 상대적으로 분리가 쉽게 되어 넓은 범위와 커다란 크기의 DNA를 분리하는데 효율을 가지게 된다. 아래 의 표는 Gel의 농도에 따른 DNA의 분리범위를 나타낸 표이다.

보는 바와 같이 아가로오스의 농도가 낮으면 비교적 커다란 크기의 DNA를 농도가 높을수록 작은 크기의 DNA를 분리하는데에 적합하다 할 수 있다.

참고자료

· - DAVID P. CLARK, “Molecular Biology”, Elsevier, 2013.
· - Mary K.Campbell 외 1인, “Biochemistry 7th ed”, ThomsonBrooks/Cole, 2011.
· - 강영희, 생명과학대사전, 아카데미서적, 2008.
· - http://www.ibric.org/