[분자세포생물학] Isolation of genomic DNA

목차

1. Introduction
2. Materials
3. Methods
4. Result
5. Discussion

본문내용

Ⅱ. Material
- Extraction buffer(100ml) : CTAB(C19H42NBr), EDTA, Tris-HCl(pH 8.0), NaCl
polyvinylpyrrolidine(PVC-40), Ascorbic acid
RNase A(20mg/ml), Chlroform, Isopropanol, 70% EtOH, d.w

Ⅲ. Method
1. Sample 준비(2.5-5mg) - 식물 세포
⇒ -70oC에서 sample을 2ml eppendorf tube에 쇠구슬과 함께 급속 냉동한다.
2. Tube에 700ul extraction buffer을 첨가하고 voltexing 하며 homogenization한다.
3. RNase A 7ul를 넣고 잘 섞은 후 65oC에서 5분간 incubation.
4. Chloroform 570ul을 넣고 mixing 하고 centrifuge(12,000rpm for 15min)
5. 상층액을 새 tube에 옮기고, 0.7vol 의 isopropanol을 넣은 뒤 mixing
6. -20oC에서 40분간 방치(침전)
7. Centrifuge (12,000rpm for 10min)후 상층액 제거.
8. 70% EtOH 첨가하고 ice에서 10분 방치 - Centrifuge(12,000rpm for 10min)
9. pellet drying - d.w 20ul에 녹인다.

참고 자료

한국유전학회, 유전학 실험서, 라이프 사이언스, 2004,
정병균, 진단 분자생물학, 현문사, 2002,
DNA프로필연구회, 유전자 감식, 탐구당, 2001,