[A+레포트] RNA 분리 및 농도측정과 전기영동법

소개

A+ 받은 자료로, RNA 분리 및 농도 측정, 전기영동 등과 관련된 내용을 아주 꼼꼼하고 충실하게 작성한 레포트입니다.
레포트에 담은 이론만 보아도 충분히 이해가능 할 정도로 자세하게 작성하였습니다.
중간,기말 시험대비용으로도 큰 도움이 되실것입니다.

목차

1. 주제
2. 재료 및 기구
3. 실험목적 및 원리
4. 실험방법
5. 실험결과
6. 이론
7. 고찰
8. 참고문헌

본문내용

1) RNA 분리
배지에서 배양시킨 hepatic cell을 Trizol을 이용해 plate로부터 분리한 후, RNase 저해제 등을 처리하여 몇 번의 원심분리 단계를 거쳐 RNA를 추출한다. Trizol은 RNA 분해효소 억제제인 guanidinium isothiocyanate가 포함되어 있어 세포를 파괴시키고, 기계적으로 균질화시키는 역할을 한다.

2) 흡광계를 이용한 농도, 순도 측정.
핵산이 함유된 용액에 의해 흡수되는 자외선의 양은 용액 속에 있는 핵산의 양과 비례한다. 보통 260nm 파장에서 측정하며, 이 파장(A260)에서 1.0은 ml당 RNA 40ug에 해당한다. RNA 용액에 의해 흡수되는 자외선의 양은 용액 속에 있는 RNA 용액의 260nm와 280nm에서 흡광도의 비율(A260/A280)은 1.8이다. 1.8이하의 비를 갖는 것은 페놀이나 단백질 같은 불순물이 있다는 것을 의미한다.

3) Agarose gel 상에서의 전기영동.
동물의 세포로부터 분리한 RNA를 agarose gel에서 전기를 걸어 분리하면 UV하에서 band의 밀도를 통해 농도를 알 수 있으며, standard marker와의 비교를 통해 크기를 분석 할 수 있다.
전기이동은 전기장이 걸린 한천겔(agarose gel)에서 DNA가 크기에 따라 분리되도록 하는 실험 방법이다. 전기 이동된 DNA는 ethidium bromide로 염색함으로써 눈으로 확인할 수 있고 그 밝기로 농도를 추정할 수 있다. 농도를 정략적으로 측정하기 위해서는 농도를 알고 있는 DNA를 대조구로써 함께 전기 이동한 후 겔의 사진을 찍고 band의 밀도를 densitometer로 읽는다. 대조구 DNA의 농도와 측정된 밀도 사이의 표준곡선을, 그리고 샘플 band의 밀도에 해당되는 DNA 농도를 내삽(intapolation)으로 얻기도 한다.

1. RNA 분리
Cell collecting step
① plate에서 배양한 mouse의 hepatic cell을 PBS 1ml로 2번 washing한다.

참고자료

· 한국생화학회, 실험 생화학, 탐구당, 1997.
· 한국식품영양과학회, 식품영양실험핸드북, 효일 도서 출판사, 2000.
· 김현숙 외, 최신 영양생화학 실험, 교문사, 2005.
· 김정국 외, 유전자 클로닝과 RNA 분석 입문서, 월드사이언스, 2006.
· 한국유전학회 실험서 집필위원회, 유전학실험서, 라이프사이언스, 2004.