[생물]NORTHERN BLOTTING

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목차

NORTHERN BLOTTING 요약
1. 목적
2. 원리
3. 용도
4. 방법
5. 실험절차
NORTHERN BLOTTING 사진

본문내용

NORTHERN BLOTTING 요약
1975년 Southern EM이 제한효소를 절단해서 agarose gel 전기 영동으로 분획한 DNA 단편을 직접 Nitro-cellulose filter에 옮기는 방법을 개발했다. 이 Southern blot는 유전자 해석 수단으로서 아주 유용하기 때문에 그 후 널리 이용되고 있다. 1977년 Stark는 agarose gel 전기 영동으로 분획한 RNA를 filter에 옮기는 방법을 개발했다. 이 방법은 DNA에 대한Southern blot 와 대비시켜 Northern blot로 부르게 되었다.
*1977년 Stark가 개발
*기본적인 원리는 Southern Blot과 동일
*RNA의 정성, 정량을 행하기 위하여 이용, RNA의 크기나 전사량의 정보가 얻어져 mRNA로의 전사가 어느 정도 행하여져 있는가를 알 수 있음
*RNA분자는 Rnase에 의해 쉽게 파괴되므로 이에 의한 오염 주의
*RNA는 DNA와는 달리 2차구조를 형성하고 있는 경우가 많으므로 변성시켜줘야 함 -> 포름알데히드 등의 변성제 첨가

1. 목적
RNA의 정성, 정량을 행하기 위하여 이용된다. 이 방법에 의해 RNA의 크기나 발현 량의 정보가 얻어져 mRNA의 발현이 어느정도 행하여져 있는가를 알 수 있다.

2.원리
southern blotting이 DNA를 다루는 작업인 반면에 northern blotting은 RNA를 다루는 기술이다. northern blotting은 우선 원하는 세포나 조직에서 RNA를 추출해서 RNA의 크기별로 agarose gel에서 전기영동을 통하여 분리하게 된다. 이것을 다루기 쉬운 nitrocellulose 흡착지나 nylon흡착지에 옮긴 후 원하는 보합결합시킨 후 자가방사기록함으로써 원하는 전령 RNA의 크기와 상대적인 양을 측정하는 것이다.

참고 자료

없음