RT-PCR

목차

1. 목적

2. 원리
1) PCR
2) PCR 원리와 과정
3) 전기영동
4) SDS page
5) PCR의 종류
6) RT-PCR
7) heat shock protein

3. 기구 및 시약

4. 방법

5. 실험데이터 와 결과

6. 고찰

본문내용

Polymerase chain reaction의 약자로서 인용문헌 http://terms.naver.com/entry.nhn?docId=296731&cid=42412&categoryId=42412
DNA 사슬 중에서 목적하는 일부분만을 대량으로 증폭시키는 뮬리스에 의해 고안된 방법이다. 처음에는 대장균에서 분리한 DNA 중합효소을 사용하였으므로 사이클이 지날 때마다 효소를 첨가해야 하는 불편 때문에 널리 이용되지 않았으나 사이키가 높은 온도에서도 그 활성이 없어지지 않는 Taq DNA 중합효소를 발견한 후 실험방법이 보편화되었다.

<중 략>

증폭시키려 하는 주형 DNA와 함께 우리가 증폭시키고자 하는 특정 지역에 결합 하는 프라 이머와 DNA 중합효소, 새로운 DNA를 만들기 위한 재료인 dNTP를 함께 집어 넣어 준다.이제 94~96℃ 정도로 열을 가하면 한 개의 DNA가 두 가닥으로 분리된다. 이후 온도를 50~64℃ 정도로 내리면 프라이머와 중합효소가 외가닥 DNA의 특정 부위에 결합하고, 다 음에 합성되어 2개의 DNA가 된다. 이것이 1주기가 되며 다시 온도를 올려서 이 과정을 반 복하면 4개, 8개, 16개가 되는 식으로 폭발적인 연쇄 작용을 통해 원하는 DNA의 양이 늘 어나게 된다. 여기서 프라이머란 DNA 중합효소가 붙어서 DNA 합성을 개시할 수 있는 15~50 염기쌍(base pair) 정도의 올리고뉴클레오티드를 말한다. DNA 중합효소는 말 그대로 DNA를 합성할 수 있는 효소로서, 개발 초기에는 대장균의 DNA 중합효소를 사용했다. 하지만 고온, 저온을 왕복하는 과정 때문에 고온에서 DNA 중합 효소가 변형되어, 매번 새로 넣어 줘야 하는 불편함이 있었다. 이를 개선하여 호열성 세균 인 테르무스 아쿠아티쿠스에서 얻은 Taq 중합효소를 이용하여 변형 문제를 해결하였다. 하지만 Taq 중합효소는 DNA 중합에 오류가 빈번히 일어난다는 문제가 있기 때문에, 현재는 고세균 피로코쿠스 푸리오수스에서 얻은 Pfu 중합효소와 Taq 중합효소를 혼합하여 PCR법 에 주로 이용하고 있으며 다른 중합효소도 널리 이용된다.

참고자료

· http://terms.naver.com/entry.nhn?docId=1224151&cid=40942&categoryId=32326
· 생명과학대사전, 초판 2008, 개정판 2014, 도서출판 여초
· http://www.bbioo.com/experiment/12-695-2.html
· http://if-blog.tistory.com/722
· http://www.aaranyak.org/pcr.html
· http://terms.naver.com/entry.nhn?docId=296731&cid=42412&categoryId=42412