wound healing assay, RT-PCR 교차검증

목차

1. 실험 목적
2. 개념 소개(이전 내용 포함)
3. 사용한 기구 및 시약 형태
4. 실험 과정
5. 실험결과 및 고찰

본문내용

1. 실험 목적
암세포의 일종인 시료를 이용하여 Wound healing assay를 진행하고 이때, 적절한 환경을 조성하여 용액 A와 B가 해당 암세포의 증식을 통한 집단 세포이동에 미치는 영향을 알아본다. 또한, RT-PCR을 이용하여 용액 A와 B가 암세포인 해당 시료를 억제하는 경우가 발생할 시, Housekeeping gene인 GAPDH와 암세포의 이탈을 가능하게 해주는 MMP-2의 증식 정도를 관찰하여 어떠한 결과를 나타내는지 비교 분석한다. 결과적으로 앞선 두 실험의 결과들을 교차 검증하여 용액A와 B의 효과에 대한 정보를 더욱 정확히 알아본다.

2. 개념 소개 (이전 내용 포함)
RT-PCR
역전사 효소를 이용하여, 해당 단백질을 암호화 한 mRNA에 상보적인 DNA를 제작하고 그 제작한 DNA를 다시 polymerase를 이용하여 두개의 사슬을 만들어 cDNA형태를 제작을 하게 되고, 이를 vector등을 이용하여 숙주세포에 형질전환을 이용하여 증식시킨다. 또한 이 숙주세포는 대부분 단세포의 미생물을 사용하는 경우가 많기 때문에 splicing즉 유전자를 절단하는 역할이 진행이 되지 않기 때문에, 진학 세포에서 얻어낸 단백질을 재조합 DNA기법을 이용하여 미생물에 도입할 경우 cDNA형태로 제조하여 splicing과정이 필요하지 않게 만들어주는 과정이 필수적이다.
위의 역전사 효소 즉, reverse transcriptase을 사용하는 PCR기법은 유전자 발현의 분석 실험에서 사용하는 기법 중 하나이며, 이는 크게, RNA의 추출, 역전사, cDNA제작, 증폭, 검출의 과정으로 진행이 된다.
이 실험방법은 세포에서 추출한 RNA즉 single strand RNA의 증폭에서 이 RNA가 single strand이기 때문에 나오는 문제점을 해결하고자 개발된 방법으로, 해당 RNA를 보다 안정적인DNA로 제조하는 즉, 역전사를 진행하는 과정을 포함한다.

참고 자료

없음