pcr&전기영동

목차

1. Subject
2. Introduction
3. Material &　Methods
4. Results
5. Discussion
6. Reference

본문내용

1. Subject
PCR & Agarose Gel Electrophoresis
◆ PCR의 원리를 학습하고, Technique을 습득한다.
◆ Agarose Gel Electrophoresis의 원리를 이해하고, 사용되는 실험에 대해 학습한다.

2. Introduction
(1) PCR
중합효소 연쇄반응(polymerase chain reaction, PCR)은 특정 DNA 부위를 특이적으로 반복 합성하여 시험관내에서 원하는 DNA 분자를 증폭시키는 방법으로서, 아주 적은 양의 DNA를 이용하여 많은 양의 DNA 합성이 가능하므로 분자 생물학적으로 제한효소의 발견만큼 획기적인 것이라고 할 수 있다. 즉 genomic DNA와 같은 아주 큰 DNA로부터 원하는 DNA 부분만을 선택적으로 증폭시킨 후 일반적으로 사용되는 agarose gel이나 polyacrylamide gel 상에서 뚜렷하게 보이는 band로 가시화할 수가 있다.
1) 과정
① Denaturation
PCR의 가장 첫 단계이며, 90°C ~ 96°C로 가열하여 온도가 높아짐에 따라 DNA의 염기 사이에 있는 수소결합이 끊어져 double strand DNA를 single strand DNA로 분리시킵니다. 높은 온도일수록 single strand DNA로 잘 이행되지만 Taq DNA polymerase도 온도가 아주 높은 상태에서는 활성이 낮아질 수 있으므로 보통 94°C 로 한다. 첫 cycle에서는 확실한 변성을 위하여 약 5분간 지속시킨다.
② Annealing
50°C - 65°C에서 진행된다. 각각 두 가닥으로 분리된 DNA molecule에 primer가 붙는 과정이다. Primer는 그들과 상보적인 염기를 가지고 있는 DNA 서열에 달라붙는다. 이 과정이 바로 PCR의 accuracy를 결정짓는 단계이며, 어느 온도로 진행되는 가는 primer의 길이와 그것을 이루고 있는 염기의 종류에 따라 달라진다. 만약에 온도가 너무 높으면 primer가 DNA molecule에 잘 달라붙지 않아 그 효율이 떨어지며, 반대로 온도가 너무 낮을 경우에는 primer가 mismatch할 확률이 높아서 정확도가 그만큼 더 떨어진다.

참고자료

· http://myhome.naver.com/biologian/
· http://biochemistry.yonsei.ac.kr/biochem_molecular/gene_cloning_08.php
· http://biochemistry.yonsei.ac.kr/biochem_molecular/gene_cloning_11.php