PCR 결과 레포트

최초 등록일
2010.05.07
최종 저작일
2008.10
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소개글

유전공학 실험법 중에 한 실험인 PCR 실험
실험 사진도 있구요~
제가 이 레포트 들로 A+ 받았어요~

목차

PCR (Ploymerase chain reaction)
Gene clean (gel elution)
PCR Product Cloning(T-vector)
E. coli Transformation
Positive control & Negative control
* Positive control
* Negative control
-실험결과

본문내용

PCR (Ploymerase chain reaction)

1. PCR로 증폭할 DNA에 actin gene 부분을 잘라낸다.
① d.d water 7㎕
② Actin primer 5` 1㎕
Actin primer 3` 1㎕
③ Pig DNA 1㎕ (or plant DNA 1㎕)
④ 2× i - Max (Tag polymerase, dNTP) 10㎕
= total. 20㎕

2. 만든 용액을 원심 분리한다.

3. PCR을 30번 돌린다.
① 95℃, 2min
② denture to separate template strands (95℃, 30 sec) : Denature DNA (변성)
③ anneal primer to single strand template (55℃, 30 sec) : Anneal Primers
④ polymerase synthesis new DNA strand to made double strand (72℃, 1 min)
: Extend Primers (DNA 합성)
⑤ 72℃, 5min
⑥ 쉬는 time (16℃)
⑦ go to 2) - 4) (30 times)

* 원리
① DNA의 변성 (denaturation) : 94℃ ~ 96℃로 가열하여 이중가닥 DNA를 단일가닥 DNA로 분리시킨다.
② Primer의 결합 (annealing) : 50℃ ~ 65℃에서 진행된다. 염기간의 결합은 G와 C는 세 군데에서 수소결합이 일어나고, A와 T는 두 군데에서 결합이 일어난다.
③ DNA의 합성 (polymerization) : 70℃ ~ 74℃에서 시행하여 DNA 합성이 일어난다. 원하는 PCR 산물의 크기가 크거나 반응요소의 농도가 낮을 때에는 시간을 연장시킬 수 도 있다.
▷ PCR에 넣은 DNA는 2n으로 증폭된다.

4. 전기영동을 하기 위해 준비되어진 agarose gel 판의 well에 만들어진 20㎕ 용액을 조심 스럽게 loading 한 후 전기영동하고 band를 관찰한다.

참고 자료

없음

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