[분자유전학실험]4.Protein extraction and Quantitative analysis

소개

실험서입니다.

목차

1. Abstract
2. Introduction
3. Material & Method
4. Result
5. Discussion
6. Reference

본문내용

1. Abstract
실험에서 단백질을 이용한 다음실험을 위해서는 단백질의 양을 아는 것이 상당히 중요하다. 따라서 정량측정과정이 필요한데 이번 실험은 우리가 필요한 단백질을 추출하고, 추출한 단백질의 양을 정량해보는 것이다.
실험은 잎과 줄기에서 추출한 단백질을 각각의 조건 (1조 Heat shock 40℃ 8h Leaf, 2조 Heat shock 40℃ 12h Leaf, 3조 Control Leaf, 4조 Heat shock 40℃ 8h Stem, 5조 Heat shock 40℃ 12h Stem, 6조 Control Stem)에서 발현시키고 그 정량을 595nm에서의 흡광도에서 Bradford assay방법을 통해 측정하였다. Bradford assay에는 BSA라는 단백질이 사용되었는데, BSA는 일반적으로 알고 있는 단백질로 BSA의 양과 알려지지 않은 양의 단백질을 비교하여 다른 단백질의 양을 조사하는 데에 사용된다. 따라서 우리가 추출한 단백질은 BSA를 통한 Bradford assay의 결과와 비교함으로써 단백질의 정량을 측정한다.
실험결과. control조건의 잎과 줄기에서의 단백질 농도가 heat shock을 주었던 다른 조건의 단백질 농도보다 많이 나왔음을 확인할 수 있다. 이는 heat shock 가했을 때 외부의 스트레스에 대하여 단백질이 파괴되고 발현이 저하되었음을 짐작해 볼 수 있다. 하지만 이번 실험은 단백질의 농도만 측정하여 얼마나 단백질 추출을 잘 했느냐를 확인했을 뿐, 이번 실험에 얻어진 단백질 농도를 통해 heat shock을 가했을 시 어떤 단백질이 발현하였으며, 그 단백질이 얼마만큼 발현되었는지를 알기 위해서는 다른 정량법이나, 면역침전법, SDS page 등의 추가적인 실험이 필요하다고 본다.
2. Introduction
(1) 단백질 정량
단백질을 가수분해하면 peptide bond가 끊어지면서 아미노산이 유리된다. 보통 peptide나 단백질을 6N HCl 용액이 들어있는 시험관에서 공기를 제거하고 밀봉한 후 100°에서 8-24시간 동안 가열하여 가수분해 시킨다. 이러한 가열조건에서는 모든 peptide bond가 파괴되고 glutamine과 asparagine의 경우에는 side chain의 amide bond도 파괴되게 된다. 또한 tryptophan과 serine, threonine 등의 아미노산은 파괴되기 때문에 이러한 단백질을 정량하기 위해서는

참고자료

· • 미생물학 12판 (Brock biology of microorganisms) / Madigan 저 오계헌 역 / 바이오사이언스 / 2009.04.15 / p440
· • http://mybox.happycampus.com/nike0/371470
· • http://whitemagnolia.springnote.com/pages/3526445
· • http://blog.naver.com/ckurapika0?Redirect=Log&logNo=10048124339
· • http://en.wikipedia.org/wiki/Bovine_serum_albumin