Cell Lysis & Protein extraction

목차

1. 실험목표
2. 실험이론
3. 기구 및 시약
4. 실험 방법 및 순서

본문내용

2. 실험이론
- Cell Lysis 방법
세포파쇄 방법에는 물리적인 방법과 비물리적인 방법이 있다.

물리적인 방법 : Blend에 갈아주기, sonication
비물리적인 방법 : freezing-thawing, osmotic shock, enzyme treatment, detergent처리 등..

1. freezing-thawing의 경우, 여러 번 반복할 경우 세포 내에 형성된 얼음이 membrane leakage를 유발하게 되어 periplasmic, intracellular protein이나 감염중인 virus particle이 유출되게 된다.
Cell type, age, final freeze temperature, heating과 coding속도가 중요하게 작용을 하며, 장점으로는 간단하고 Closed system에서 실험이 진행될 수 있으므로 병원성균 실험에 유리하다. 단점으로서는 효과가 크지 않아 세포벽을 지니고 있거나 freezing을 막는 intracellular solute를 지니고 있는 경우에는 부적합하다.

2. Sonication 방법의 경우에는, 20KHz이상의 파장을 쏘여줄 경우 gaseous cavitation이 형성되고, 형성된 gas bubble이 깨지면서shock가 일어나 세포가 파쇄되는 원리를 가지고 있다.
이 방법은 세포의 농도에 무관하며 power input나 exposure time에 영향을 받는다. 주의사항으로서는 contact time이 증가할수록 heat, free radical, ion등이 생성되어 단백질 등을 변성시킬 수 있으므로 반드시 얼음에 고정시키고 실험을 진행한다.

3. Enzyme treatment 방법인 lysis buffer를 이용 시에는 detergent가 세포막으로부터 protein이나 lipoprotein을 분리시켜 세포 내 물질이 유출되게 된다. 주로 bile salt나 sodium laurylsulphate, sodium dodecylsulphate, Triton 등이 쓰이며, pH나 temperature에 민감하게 작용한다. 그러나 거품, 단백질의 변성, 침전들이 일어나 일반적으로 사용되지 못하는 단점이 있다.

참고 자료

없음