[분자유전학실험]5.SDS-PAGE

소개

실험서입니다.

목차

1. Abstract

2. Introduction

1) Coomassie R250 염색법
2) Coomassie G250 염색법

3. Material & Method

4. Result

5. Discussion

6. Reference

본문내용

1. Abstract

SDS-PAGE는 저번 실험에서 추출한 당근의 protein을 가지고 크기별로 분리하는 실험으로 protein을 크기별로 분리하여 염색하고, 패턴이나 동일한 양이 loading되는지 확인함으로써 다음 실험에서 western blot할 때 이용하기 위한 실험이다. 여기에서 protein은 gel속에 있기 때문에 gel은 흐물흐물하여 이동성이 크고 antibody를 붙일 수 없어서 다음실험인 western blot에서 이용 할 수 없다. 따라서 antibody를 붙일 수 있도록 하기 위해서 membrane 표면으로 protein을 이동 시킨다.
먼저 SDS-PAGE gel을 만들어야 하는데 SDS를 사용함으로써 protein의 고유의 전하를 없애고 음전하를 띄게 한다. 그리고 3차 구조를 풀고 각각의 소단위체로 분리되게 된다. 이로써 SDS-PAGE gel running시키면 protein의 molecular weight와 전하량에 따라 이동하는 속도 차이로 분리된다. 이후 Coomassie blue로 염색하여 가시화시켜 관찰한다.

<중략>

2) SYPRO Ruby Stain
Silver staining만큼의 민감도를 가지며 실험자는 실험 경험이 많아야 좋은 결과를 얻을 수 있다. SYPRO Ruby는 형광염색으로 2D electrophoresis에 많이 사용하며 Coomassie blue보다 민감도가 높으며 silver staining보다는 민감도가 떨어진다. Staining이 빠르며 염색 후 mass spectrophotometry에도 사용이 가능 하다.

- 염색방법 : 10% methanol, 7% acetic acid에 30분 * 3회 50rpm에 방치한다. (마지막 과정에서 overnight가 가능 합니다) 3시간 동안 염색액으로 염색을 한다. 10% methanol, 7% acetic acid으로 30분간 세척해준 후 Gel을 스캔 한다.

참고자료

· • 분자생물학 2판 / Robert F. Weaver / 라이프사이언스 / 2003. 2
· • http://www.genehunters.co.kr/Training/03_3.htm
· • http://www.elpisbio.com/sub/support/protocols/Staining.htm
· • http://www.genehunters.co.kr/Training/03_1.htm
· • http://www.elpisbio.com/sub/support/protocols/Protocols.htm