<서강대 현대생물학실험>친수성 크로마토그래피를 이용한 단백질 oligomer 분석 실험
- 최초 등록일
- 2021.09.06
- 최종 저작일
- 2020.09
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소개글
"<서강대 현대생물학실험>친수성 크로마토그래피를 이용한 단백질 oligomer 분석 실험"에 대한 내용입니다.
목차
1. Abstract
2. Introduction
1) GFP, mCherry, DsRed
2) 크로마토그래피의 정의와 종류
3) 흡광패턴과 시료 농도에 따른 변화
4) oligomer
5) SDS-PAGE
3. Material and Method
4. Result
5. Discussion
본문내용
Abstract
이번실험은 단백질의 혼합물들을 크로마토그래피, 분광광도계, gel등을 통해 분리, 정제하는 것이다. GFP란 해파리로부터 유래되었으며 eGFP는 F64L, S65T에서 돌연변이가 일어난 GFP이며 weak-dimer형태이다. mCherry는 RFP의 일종이며 maturation time이 짧고 monomer이다. DsRed도 RFP의 일종이며 tetramer로 크기가 크다. 크로마토그래피의 공정은 이동상과 고정상으로 이루어지며 이번실험에서 한 SEC는 gel의 pore을 통해 분자 크기에 따라 분리되며 크기가 큰 분자가 먼저 관 밖으로 나온다. SDS-PAGE는 discontinuous buffer system을 이용하여 staking gel이 존재하기 때문에 sample 손실이 적다. 반대로 Native PAGE gel은 단백질의 구조를 파악할 수는 있으나 staking gel이 존재하지 않아 분리능이 낮다. 실험방법으로는 전기영동 tank을 조립한 후 gel을 붓고 SEC을 거친 DsRed+mCherry sample 9개를 loading한 뒤 band 부분이 잘려나가지 않게 조심해서 플라스틱 용기에 담아 CBB로 염색해준 뒤 탈색을 하여 결과를 관측한다. 실험결과로는 <Fig.6>에서 mCherry는 587nm에서 DsRed은 558nm에서 흡광도를 가짐을 알았다. 또한 DsRed가 mCherry보다 먼저 추출되므로 sample이 후반으로 갈수록 DsRed의 높은 peak을 보이다가 sample 5에서 가장 높은 peak
참고 자료
왓슨, 2014,왓슨 분자생물학 7판, 양재섭, 바이오사이언스 출판, pp173~179
Cynthia Gibas, Per Jambeck, April 2001. “Developing Bioinformatics Computer Skills,” O’reilly press
캠벨, 2019, 캠벨 생명과학 11판, 전상학, 바이오사이언스 출판,pp80~83
