Restriction enzyme digestion-Ligation

소개

Restriction enzyme digestion
Ligation

목차

Theme

Date&name

Abstract

Method
-Restriction enzyme digestion
-Ligation
Principle
-Restriction enzyme digestion
-Ligation

Results

Discussion

References

질문

본문내용

미생물학 실험 레포트 양식
Theme(제목)
Restriction enzyme digestion
Ligation
이름)
2010년 06월 01일 3조
Abstract(요약)
유전자 재조합 실험을 하기 위한 유전자 DNA의 제한효소 절단 실험을 하였다. 처음에 gaIK을 섞은 후 Enzyme를 넣고 Incubation을 한 후 phenol/chloroform extraction 처리를 해주고 chloroform extraction을 해준 후 ethanol precipitation 처리를 하고 전조 시킨 뒤 증류수에 녹여서 전기영동을 한 후 Ligation를 하였다.
Method(실험방법)
Restriction enzyme digestion
두 개의 1.5 ml tube를 준비한 후 각각의 tube에 다음과 같이 넣었다. A-tube : Digestion of the PCR fragment (total 30 μl)
Water(3차증류수) 5 μl
galK PCR product 20 μl
Buffer(10x) 3 μl
Hind III 1 μl
Sac I 1 μl
B-tube : Digestion of the plasmid vector (total 30 μl)
Water(3차증류수) 5 μl
β - DNA 20 μl
Buffer(10x) 3 μl
Hind IIII 1 μl
Sac I 1 μl
손가락으로 tube 아래를 여러 번 쳐서 내용물을 잘 섞었고 5초 미만 동안 원심 분리하여 내용물을 tube의 아래에 모았다. 그리고 37℃에서 3시간 동안 넣어두는데 이때 제한효소가 DNA를 절단한다.
.
.

참고자료

· Restriction Enzyme Digestion |작성자 chj_2731
· References(참고문헌)
· 미생물 실험 13과 유전자 재조합 실험 페이지 104~110