황색포도상구균의 coagulase 검출

소개

황색포도상구균으로부터 coagulase 효소 합성 유전자를 PCR을 이용하여 증폭하여 확인한다

목차

Ⅰ. Purpose
Ⅱ. Principle
Ⅲ. Materials
Ⅳ. Methods

본문내용

각 시약의 용도
-TE buffer
pH조건을 맞춰주어 완충역할을 한다. DNA이외의 이물질을 제거하는 역할을 한다.
-20% SDS 용액
계면활성제로, 단백질을 변성시키며 s-s구조를 파괴하여 세포막과 세포벽 등을 파괴한 다.
-Protinase K
단백질 분해 효소이다.
-5M NaCl
Buffer 의 염분농도조건을 맞추어 주기위해 사용된다.
-CTAB (cetyltrimethylammonium bromide)
핵산(nucleic acids)하고 결합해서 nucleic acid-CTAB complex 를 만든다.
원심분리를 하게 되면 nucleic acid-CTAB complex 가 침전되고 침전을 모아서 ethanol 을 이용해서 핵산만 침전시킨 후 ribonuclease로 처리하면 순수한 DNA를 얻을 수 있다.
-PCI (Phenol : Chloroform : Isoamylalcohol = 25:24:1) 및
CI (Chloroform : Isoamylalcohol = 24:1)
DNA 추출은 이들의 화학적 성질이 다른것에 착안하여 분리한다. 이물질들이 수용성이 냐 지용성이냐를 따져서 분리하는 것이다. DNA는 산성을 띈다. 따라서 수용성 물질이 고 탄수화물, 단백질도 어느정도 수용성이어서 이들을 분리해 내는것이 Point다.
Phenol은 DNA는 녹이지 못하지만 단백질을 녹이고, Chloroform은 지질을 녹인다. 따라서 이들은 세포내 지질과 단백질을 녹이고 DNA와 상당수 탄화수물은 물에 남아 있게 된다. 윈심분리는 하게되면 무거운 Phenol과 Chloroform은 가라앉고 가벼운 수 용액(DNA포함)은 위에 뜨게 된다. 이 상층액을 분리하여도 Phenol과 Chloroform의 잔존물이 섞여 있을 수 있기 때문에 다시한번 CI로 불순물을 제거한다.

황색포도상구균 (Staphylococcus aureus)

포도상구균의 한종류.

참고자료

· 없음