[세균학실험]3.황색포도상구균의 coagulase 유전자 검출

소개글

실험서입니다.

목차

1. Result
2. Description
3. Discussion
4. Reference

본문내용

이번 실험은 항생제 내성 균주로써 많이 연구되고 있는 포도상구균의 대표적 병원균인 항색포도상구균(Staphylococcus aureus)으로부터 coagulase를 분비하는 유전자를 PCR을 이용하여 증폭한 후 전기영동 사진을 통해 확인하는 실험이다.
먼저 DNA분리 과정을 통하여 황색포도상구균에서 DNA를 추출하여 전기영동을 통해 추출이 되었는지 알아보았다. 1조와 3조 각각의 lane에서 밴드가 이상한 모양으로 나타났긴 했지만 1~5조까지 무든 조에서 DNA밴드가 모두 나타났으며 이는 황색포도상구균에서 DNA를 잘 분리해서 추출했음을 알 수 있다. 각각의 DNA밴드는 marker의 10,000bp보다 높은 위치에서 나왔으며 따라서 우리가 추출한 DNA의 크기는 10kb 이상의 크기임을 알 수 있다.
다음으로는 추출한 DNA를 가지고 원하는 coagulase 효소 합성유전자 부위를 증폭시켜 전기영동으로 알아보았다. DNA분리 과정에서 Pellet를 공기 중에서 말리는데 시간이 많이 걸리기 때문에 앞 반에서 같은 방법으로 추출한 DNA를 가지고 실험을 하였다. 전기영동 결과 3조에서 1개, 4조에서 2개의 lane 제외한 모든 lane에서 coagulase gene이 검출되었다. 나오지 않은 lane의 경우, 같은 방법으로 만든 다른 경우의 DNA band가 잘 나온 것으로 보아 loading에 문제가 있다고 보기에는 무리가 있고 실험과정 중 오류가 난 것이라 생각된다. 아마 Template DNA를 취할 때 제대로 취하지 못하였거나 앞 반에서 애초에 DNA추출을 잘 못 했을 수도 있었을 것이다. 또 실험과정 중 어떠한 요인에 의해 DNA 파괴되었을 수도 있다. 아니면 쓰인 시약 중에 한 가지가 착각해서 양을 잘못 넣어서 충분한 기능을 수행하지 못했다고 생각될 수도 있다. 나온 band의 위치는 marker의 600bp와 800bp사이에 나옴을 알 수 있었다.

참고 자료

바이오 테크니컬 시리즈 PCR 실험노트 지성길 월드사이언스 2002.8.15 발행
http://kin.naver.com/qna/detail.nhn?d1id=11&dirId=1115&docId=59590997&qb=KGNvYWd1bGFzZSk=&enc=utf8&section=kin&rank=4&sort=0&spq=0&pid=f9CDLloi5URssuBB4oRsss--401406&sid=S9kjJuMg2UsAAFvaI6Q
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