Agarose Gel Electrophoresis(아가로스겔전기영동)

소개

아가로스겔전기영동

목차

1.실험이론
(1) 전기영동법의 원리
(2) 아가로오스 겔 전기영동법
(3) 아가로오스
(4) 아가로오스 겔 전기영동 원리
(5) TAE와 TBE의 비교
(6)Agarose gel 전기영동 시 DNA의 이동에 영향을 주는 요인들
(7) Loding dye를 넣는 이유

2.실험기구&시약

3.실험방법

4. 실험 시 주의 사항

본문내용

1. 실험 이론
(1) 전기영동법의 원리
① 전기영동은 전기장 안에서 하전 된 입지가 양극 또는 음극으로 이동하는 현상.
② 이동하는 속도는 입자의 전하량, 크기와 모양, 용액의 ph와 점성도, 용액에 있는 다른 전해질의 농도와 이온의 세기, 지지체의 종류 등 여러 가지 요인에 의해 결정. 즉, 분자 자체의 성질에 따라서 결정된다.
③ 전기영동법은 아미노산, 뉴클레오티드, 단백질들과 같은 하전 된 물질들을 분리하거나 분석하는데 매우 효과적인 수단으로 이용.

(2) 아가로오스 겔 전기영동법
① DNA를 200bp에서부터 50kb까지 분리, 정제하여 확인하는 방법으로 아가로오스 겔을 이용하는 전기영동법.
② 방법이 간단하고 소요되는 시간이 짧을 뿐 아니라 밀도, 기울기, 원심분리법으로는 분리할 수 없는 DNA조각들의 혼합물을 분리.
③ 겔 상에서는 DNA는 형광성 시약으로 처리하면 염색되므로 자외선 하에서 DNA를 직접적 관찰.
ex) 형광성 시약 : 브롬화에티듐(ethidium bromide)
④ 아가로오스 겔을 통한 DNA의 이동속도 : DNA분자의 크기, 아가로오스의 농도, DNA형태, 전류의 세기, 염기 조성 및 온도 등에 좌우.

(3) 아가로오스
아가로오스는 해초로부터 추출되는 물질로서 선형 중합체의 형태를 하고 있다. 투명하기 때문에 광도계를 쓰는 측정에 적당 하며 사용이 간편하다.
특히 슬라이드를 이용하는 전기영동법에 많이 사용되며 한천 겔에서 agaropectin을 제거한 agarose는 최근에 DNA, RNA 및 플라스미드 등을 분리하는 데 유용하게 쓰인다.
(4) 아가로오스 겔 전기영동 원리
아가로오스 겔은 적당한 완충용액(buffer)에 녹여서 원하는 크기의 틀에 부어지며, 겔이 굳은 후에 사용된다. 겔이 굳는 동안 아가로오스는 지지체(matrix)형태가 되며, 그 밀도는 아가로오스의 농도(%)에 따라 정해진다. 이러한 겔에 전기장이 주어지면, 음전하를 띠는 DNA는 양극으로 이동한다.

참고자료

· 없음