대장균 DNA의 추출과 정량

소개

대장균 DNA의 추출과 정량에 관한 레포트 입니다.

목차

>Abstract
>Introduction
>Materials & Method
>Result
>Discussion
>References

본문내용

>Abstract
이번 실험은 대장균(Escherichia coli)의 DNA(deoxyribonucleic acid)를 추출하고, 겔 전
기영동법(gel electrophoresis)으로 DNA의 추출 여부를 알아보고자 하는 실험이었다. 먼저
Escherichia coli 배양액에서 Escherichia coli를 원심분리하여 얻었다. supernatant를 제거
한 후, Escherichia coli를 EDTA, SDS, NaOH 용액 등으로 세포벽과 단백질 등을 파괴한
다. 그 후 NaCl과 etahnol을 넣어 DNA를 농축시켜 얻는다. 이렇게 얻은 DNA를 RT에서
hydration 시킨 후 gel electrophoresis를 이용해 DNA의 상대적 질량, 양 등을 알아보았
다. 그리고 gel electrophoresis가 끝나면 EtBR 용액으로 DNA를 염색한 후, UV lamp 하
에서 DNA의 추출 여부를 확인해 보았다.
UV lamp 하에서 찍은 사진에서는 DNA와 RNA를 볼 수 있었다. 위쪽에는 DNA가 두 줄
로 관찰되었고, 맨 아래쪽에는 RNA들이 많이 있는 것을 볼 수 있었다. 뒷조의 DNA에는
pEX18T라는 플라스미드(plasmid)를 끼워놓았는데, 이것은 chromosomal DNA보다 크기가
작기 때문에 chromosomal DNA보다 더 아래에 나타났다. 이 사진으로 Escherichia coli의
chromosomal DNA, plasmid, RNA 등의 상대적인 크기는 알 수 있었지만, size marker가
없었기 때문에 정확한 size는 알 수 없었다.
>Introduction
1940년대 중반에 와서야 생화학자들은 DNA와 RNA의 기본적인 화학 구조를 알게되었
다. 생화학자들은 DNA를 각 구성요소로 분해할 경우 DNA는 질소염기(base), 인산
(phosphate), 그리고 디옥시리보스(deoxyribose)로 구성되어 있음을 발견하였다. 이런 이유
로 DNA의 이름은 deoxyribonucleic acid로 명명되었다. 이와 비슷하게 RNA도 염기와 인
산, 그러나 당은 이와 다른 ribose로 구성된다. DNA를 구성하는 네 개의 base는 아데닌
(adenine ; A), 구아닌(guanine ; G), 시토신(cytosine ; C), 티민(thymine ; T)이다. RNA

참고자료

· Weaver, Robert F(2003), 분자생물학, 라이프사이언스, pp. 16~31
· 이영렬(1999), (최신) 분자생물학입문, 한빛지적소유권센터, pp. 355~359, 379~380
· http://khugene.com/bbs/zboard.php?id=khugene_geneschool_class&no=31