E.coli(DH5α)에서의 Chromosomal DNA 추출 실험

소개

미생물학 실험-Chromosomal DNA 추출에 대한 실험 보고서

목차

1. 실험제목 (Title)
2. 개요 및 실험목적 (Objectives)
3. 실험원리 (Theory and Principle)
4. 실험 재료 및 실험장치 (Material and Apparatus)
5. 실험방법 (Methods)
6. 실험결과 (Results and Observations)
7. 고찰 (Discussion)
8. 참고문헌 (Reference)

본문내용

1. 실험제목 (Title)
E.coli(DH5α)에서의 Chromosomal DNA 추출 실험

2. 개요 및 실험목적 (Objectives)
E.coli의 genomic DNA(=chromosomal DNA)를 추출하여 전기영동으로 확인한다.

3. 실험원리 (Theory and Principle)
<genomic DNA, plasmid DNA, phage DNA 분리>
genomic DNA : 흔히 phenol extraction 방법을 이용한다. 단백질은 변성되어 페놀층과 수용액 층과의 경계면에 흰 찌꺼기 상태로 있게 되고 DNA는 수용액 층에 있게 된다.
plasmid DNA : 알칼리 용액에서 중성 pH로 바꿔주면 plasmid DNA는 원상태로 있고 chromosomal DNA는 엉키게 되어 정제 할 수 있다
phage DNA : 세포밖으로 나온 파지를 수집한 다음, 단백질 제거 과정을 통해 분리 할 수 있다. 우선 원심분리하여 파지와 박테리아를 분리 하고 파지를 NaCl 이나 PEG로 침전시킨다.

<plasmid DNA와 chromosomal DNA의 차이점 >
DNA 분리에는 조직, 혈액, 배양된 세포로부터 chromosomal DNA를 분리하는 방법과 염색체 밖에 존재하는 DNA, 즉 plasmid DNA를 분리하는 방법이 있다.
대장균의 종류 중에는 chromosomal DNA와는 별도로 자율적으로 증식하는 환상(circular)의 두 가닥 DNA를 세포질 내에 포함하는 것이 있는데, 이 DNA를 plasmid라고 부른다. Plasmid DNA는 상처가 없으며 꽈배기처럼 꼬여 있는 supercoil 상태(covalent closed circular)로 존재하지만,

참고자료

· 유전공학개론 DNA의 Gel 전기영동(p.41~42)/ Takeshi Uozumi / 정문각
· Principles of Genetics 7th / Robert H. Tamarin / 2002 / Mc Graw Hill
· 유전자 클로닝 입문, 강종백 외 3인, 월드 사이언스, p92~95