Taq polymerase 정제

소개

Taq polymerase 정제에 관한 실험보고서(예비, 결과 합본)

목차

Abstract.
Introduction.
Material & Method
Result
Discussion
Reference

본문내용

Abstract.
이번 실험은 열에 안정한 DNA 중합효소인 Taq polymerase의 유전자를 E.coli에서 발현시켜 정제해내는 것이다. Taq polymerase는 DNA를 복제·증폭시키는 과정인 PCR에 쓰이는 DNA 중합효소로 열에 안정하기 때문에 DNA를 denaturation시킬 때 90도 이상으로 온도를 올려도 쉽게 변성되지 않고 30 cycle을 돌릴 수 있다. 실험은 E.coli를 host로 하여 Taq를 induction한 후 centrifuge하여 pellet만을 가지고 EDTA를 가해 금속이온을 처리해줌으로서 protease의 활성을 억제시킨다. 이후 lysis buffer를 이용해 cell을 resuspend한 후 lysis mixture를 75℃에서 incubate한 후 centrifuge한다. 이후 상층액에 (NH₄)₂SO₄를 넣어주어 salting out시킨 solution을 cf하고 resuspend protein을 storage buffer에서dialysis 한다. 이후 PCR한 뒤, 전기영동으로 얻어낸 DNA를 확인한다. 우리조인 1조는 대조군인 오른쪽 끝의 sample과는 많이 다른 결과가 나오게 되었는데 이는 실험과정에서 먼지등과 같은 불순물이 포함되었거나 Taq중합과정에서 빈번히 일어나는 오류에 따른 문제일 것으로 추측된다.

Introduction.
PCR은 중합효소 연쇄반응(Polymerase Chain Reaction)의 약자로서 DNA 중합효소를 이용하여 DNA의 양을 증폭시키는 기술이다. DNA가 평상시에는 상보적인 이중나선 구조로 되어 있다는 것과, 열을 가하면 이러한 이중나선 구조가 풀려서 외가닥 DNA가 되며 이 상태에서 냉각시키면 DNA가 다시 이중나선을 이룬다는 특성을 이용한 기술이다.
PCR법을 활용하면 DNA가 아주 적은 양이더라도, 우리가 원하는 부분을 엄청난 양과 높은 정확도로 크게 늘릴 수 있다. 또한 장비가 단순하여 현재는 책상 위에 놓을 수 있는 장비로도 간단히 사용할 수 있으며 증폭에 걸리는 시간 역시 2시간 정도로 짧다는 장점을 가지고 있어서, 현대 생물학의 모든 분야에서 가장 중요한 기반 기술로 이용되고 있다. 때문에 PCR법은 현재 생물학에서 쓰이지 않는 곳이 없다고 해도 과언이 아닐 정도로 현대 생물학에서 없어서는 안 될 가장 중요한 기술에 속한다. 근래 과

참고자료

· Sambrook & Russell, 2001, Molecular Cloning. cold spring harbor laboratory Press pp.103~108
· Shamn Doon, 2002, Protein Purification Protocols, oxford pp. 163~ 167
· David L Nelson, 2006, Lehninger Principles of biochemistry 4th edition, freeman