Taq DNA polymerase 발현, 정제 및 확인

목차

1.abstract
2.Introduction
3.material&method
4.data&results
5.discussion

본문내용

이번 실험에서는 Escherichia coli (E.coli)를 사용하여 Taq DNA polymerase를 발현시킨 다음 정제한 후 발현되었는지를 확인하기 위해 PCR을 사용하였다. E.coli는 원핵생물로 박테리아의 한 종류이며 유전자 조작을 하는 실험에서 자주 사용되는 실험체다. E.coli에 넣어 발현 시키는polymerase는 Taq DNA polymerase로 ‘Thermus aquatics’라고하는 호열성균에서 유래된 DNA중합효소로, 적은 DNA를 증폭시키는 능력이 뛰어나 (Polymerase chain reaction)PCR에 자주 쓰인다. Taq DNA polymerase는 활성온도가 75℃~80℃로 일반적인 DNA polymerase는 denaturation되는 방면에 Taq DNA polymerase는 높은 온도에서도 활성을 지니는 것이 특징이다. E.coli에서 인위적으로 발현시킨 Taq DNA polymerase를 분리하기 위해서는 먼저 cell disruption을 통해 세포막과 세포벽을 파괴해야 한다. 그 다음Ammonium sulfate를 이용해서 salting out을 하고 protein precipitation을 해야 한다. 그 후 protein dialysis를 수행하여 Taq DNA polymerase의 순도를 높인다. 마지막으로 PCR과 전기영동을 사용하여 Taq DNA polymerase의 유무를 확인하고 DNA 조각을 증폭하는 기능이 잘 수행되었는지를 확인했다. PCR은 DNA의 양이 적을 때 그것을 많은 양으로 늘리기 위해 사용 된다. 일반적으로 PCR은 증폭 범위가 0.1kbp부터 10kbp정도이다.

참고 자료

Cooper, Geoffrey M., and Robert E. Hausman(2016).The Cell: A Molecular Approach. 7th ed. Sunderland, Masschusetts: Sinauer Associates, Print. pp.126-152
Watson, James D(2011). Molecular Biology of the Gene. 6th ed. N.p.: Benjamin/Cummings Pub.,. Print.